长链非编码rna在骨肉瘤患者中的差异表达研究

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1、博士学位论文中文摘要原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：斗届，、例学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学

2、位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：杯跏签中文摘要长链非编码RNA在骨肉瘤患者中的差异表达研究目的：lncRNA在基因调控中起重要作用，目前它对骨肉瘤的发病机制的影响仍不清楚。本研究利用微矩阵基因芯片技术研究lncRNA在骨肉瘤和癌旁组织表达谱的差异并初步探讨其生物学作用。方法：分别取9例骨肉瘤癌组织和对照癌旁组织，提取总RNA后进行质量测定，合格后杂交合成cDNA后

3、经过Microarray基因芯片扫描仪扫描后得到原始数据，原始数据经过统计软件转换后进行统计分析，得到两种组织之间IncRNA和mRNA的差异表达谱。分别选取上调的IncRNA6个：ASLNC21868，ASLNC22124，ASLNC23844，ASLNC24587，BE503655，BC050642，下调的lncRNA4个：ASLNC00339，ASLNCl1435，ASLNCl3387，ASLNCl8814采用SYBRGREENI实时荧光定量聚合酶链反应(ImPCR)验证，并用GAPDH做内参。综合NCBIR

4、efSeq，UCSC，RNAdb，LncRNAs等数据库资源，对芯片结果进行GeneOntology、Pathways分析等初步生物信息学分析，并通过计算Pearson相关系数(20．95)建立lncRNA与靶基因的基因网络图。结果：将差异表达的标准设为：Folgchange值>2，P值-<0．05，发现两种不同组织芯片表达有明显差异。骨肉瘤组织与对照癌旁组织相比，在检测的lncRNA表达谱中，9例样本平均上调的lncRNAs为n博士学位论文中文摘要3528个(从2723到4537)，平均下调的lncRNAs为39

5、58(从3469到4368)，其中在9例样本都上调的lncRNAs403个，都下调的IncRNAs798个，上调倍数最大的是ASLNC02724，7．23倍，下调倍数最大的是ASLNC05129，27．39倍。上调的lncRNAs略少于下调的lncRNAs。在检测的rnRNA表达谱中，9例样本平均上调的mRNAs为2604个(从1394到3710)，平均下调的rnRNAs为2344(从1513到2867)，其中在9例样本都上调的mRNAs986个，都下调的mRNAs933个。采用SYBR绿色荧光染料I(SYBRGR

6、EENI)实时检测的聚合酶链反应(ImPCR)验证表达上调的6个lncRNAs：ASLNC21868，ASLNC22124，ASLNC23844，ASLNC24587，BE503655，BC050642，表达下调的4个lncRNAs：ASLNC00339，ASLNCll435，ASLNCl3387，ASLNCl8814，RT-PCR结果显示ASLNC21868，ASLNC22124，ASLNC23844，ASLNC24587，BE503655，BC0506426个基因表达上调，ASLNC00339，ASLNCl14

7、35，ASLNCl3387，ASLNCl88144个基因表达下调，和芯片结果基本吻合。GO(GeneOntology)分析显示，在上调表达的mRNAs中，celladhesion、extracellularmatrix和proteinbinding分别在生物学进程(ontology：biologicalprocess)、细胞组件(ontology：cellularcomponent)和分子功日⋯u(ontology：molecularfunction)_三个方面富集程度最高，提示这些上调的mRNAs与这三者相关程度

8、最高；在下调表达的mRNAs中，musclesystemprocess、contractilefiber和structuralconstituentofmuscle分别在生物学进程(ontology：biologicalprocess)、细胞组件1II中文摘要(ontology：cellularcomponent)和分子功能(ontology：molecul