补肾法、疏肝法对ivf-et患者卵巢颗粒细胞gdf-9及其smads信号通路的影响

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2、表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名蛳导师签章：年月日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文补肾法、疏肝法对IⅥ?-ET患者卵巢颗粒细胞GDF-9及其Smads信号通路的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13日lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lj材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯22附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45综述GDF．9在生殖医学中研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．58个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．59中文摘要补肾法、疏肝法对IⅦ．ET患者卵巢颗粒细胞

4、GDF．9及其Smads信号通路的影响摘要目的：观察补肾法、疏肝法对体外受精．胚胎移植(IVF．ET)患者妊娠结局的影响；研究两法改善妊娠结局，提高卵母细胞质量的作用与GDF。9分泌因子及其Smads信号通路的关系，比较两法作用机制的异同，为补肾法、疏肝法治疗排卵障碍性疾病的临床应用提供实验依据。方法：2011年7月至2012年9月于白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心行IVF．ET的符合纳入标准和排除标准的60例不孕症患者，所有受试患者需经医院伦理委员会批准，签署知情同意书。其中符合中医肾虚证标准的女性患者20例为补肾组，符合中医肝郁证标准的女性患者20例为疏肝组

5、，设符合诊断标准的20例患者为对照组。补肾组为中药补肾调经方+西药控制性超排卵组，疏肝组为逍遥散+西药控制性超排卵组，对照组为单纯性控制性超排卵组。观察注射HCG日血清中E2、P、LH水平、获卵个数、受精数、优质胚胎数。留取两侧卵巢所有直径≥18mm的优势卵泡的卵泡液，用人淋巴细胞分离液分离出颗粒细胞。另将采集于白求恩国际和平医院妇产科生殖医学中心和石家庄市四院生殖医学中心的因输卵管因素行IVF．ET的正常患者的含有颗粒细胞的卵泡液用人淋巴细胞分离液分离出颗粒细胞，用含有10％胎牛血清的1640培养基培养颗粒细胞，24h后细胞贴壁，分别加入补肾调经方和逍遥散的高浓度

6、(18％)、中浓度(12哟、低浓度(6％)人含药血清处理细胞6h、12h、24h、48h，分别为补肾高、中、低剂量组和疏肝高、中、低剂量组。加正常人血清的标本为Oh即空白对照。采用实时荧光定量PCR方法检测颗粒细胞中GDF一9、BMPR-II、Alk5、Smad2／3／4mRNA的表达；采用细胞免疫荧光方法检测颗粒细胞中GDF一9、BMPR-II、Alk5、Smad2／3／4蛋白的表达；用Incell—weaem方法检测培养的颗粒细胞中GDF一9、BMPR-II、Alk5、Smad2／3／4蛋白的表达。结果：1补肾法、疏肝法对ⅣF—ET患者治疗结果的影响中文摘要1．

7、1HCG日各组患者血清中E2、P、LH水平与对照组比较，补肾组、疏肝组血清E2水平均增高(均P<0．05)，有统计学意义。与疏肝组比较，补肾组血清E2水平有下降趋势，但无统计学意义p0．05)。与对照组相比较，补肾组、疏肝组血清LH、P无统计学意义(胗O．05)。1．2各组患者获卵个数、受精数、优质胚胎数与对照组比较，补肾组、疏肝组获卵个数无统计学意义CP>O．05)，受精数明显增多(均P<0．05)。与疏肝组比较，补肾组受精数有增多趋势，但无统计学意义(胗O．05)。与对照组比较，补。肾组、疏肝组的优质胚胎个数明显增多(均P<0．05)。与疏肝组比较，补肾组优