猪囊尾蚴agb基因氨基端和羧基端片段和猪cd58基因共表达dna疫苗构建及其免疫活性初步分析

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1、新疆农业大学硕士学位论文致谢本研究属于国家重大基础研究规划项目973项目编号G1999011906中的部分内容在兰州兽医研究所寄生虫研究室完成在此对课题资助者和所有关心和帮助我的老师表示诚挚的感谢本论文是在导师才学鹏研究员岳城教授的悉心指导下经过不懈的努力才圆满完成的三年来两位导师在学习工作和生活等方面都给予了我无微不至的关怀和热情的帮助在论文的选题实验技术的指导及论文的审阅方面均倾注了大量的心血两位导师严谨的治学态度一丝不苟的敬业精神和平易近人的学者风范都给我留下深刻印象也将激励我在今后的科学道路上在人生的旅途中不畏险阻积极乐观勇往直前在此论文完稿

2、之际特向我的两位恩师致以崇高的敬意和衷心的感谢衷心感谢课题组的景志忠博士郑亚东师兄骆学农师兄窦永喜师兄蒙学莲师姐王佩雅老师贾万忠博士李辉师兄袁改玲师姐吴国华海岗郭爱疆余招锋田广孚研究员靳家声研究员闫鸿斌师弟等二年来在工作和生活上给予的关怀和帮助病毒研究室主任刘湘涛老师郭慧琛博士寄生虫研究室主任罗建勋老师为我在实验中创造了条件并提供了便利在此也向他们和全室的其他老师和同学们一并表示衷心的感谢衷心感谢新疆农业大学动物医学院的简子健院长冉多良副教授余佳琳老师杨红军师母单文鲁教授新疆农业大学研究生处王莲芳老师及其他各位老师给予我热情的支持和帮助最后真诚感谢我

3、的朋友刘志杰周红玲孟海燕王远志韩宗玺及我的父母妹妹多年来对我的关心支持和鼓励新疆农业大学硕士学位论文摘要国内外研究证明用猪囊尾蚴AgB重组疫苗或DNA疫苗免疫小鼠或猪能有效地抵御猪带绦虫虫卵的攻击感染本实验选取了猪囊尾蚴AgB氨基端AgB-N808bp和羧基端AgB-C943bp作为免疫原基因并以共刺激分子猪CD58基因为佐剂基因来构建真核表达载体PBN和PBC分别研究它们免疫BALB/c小鼠后所产生的免疫应答从而为进一步研制猪囊尾蚴DNA疫苗打下基础本实验从ConA活化的猪外周血单个核细胞PBMC提取总RNA用RTPCR方法扩增出800bp的片段将

4、扩增产物连接到克隆载体中经酶切鉴定PCR分析以及确证性测序后证明所克隆800bp的片段含CD58基因完整的开放阅读框其核苷酸序列和氨基酸序列与国外发表的猪CD58基因的同源性分别为99.4%和99.2%先将CD58插入双启动子真核表达载体pBudCE4.1的EF-1á启动子下游构建表达载体PCD再分别将AgB-N和AgB-C插入PCD的CMV启动子下游制备DNA疫苗PBN和PBC分别免疫4周龄雌BALB/c小鼠2周后加强免疫一次每周用ELISA检测小鼠血清中的抗体水平隔周用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖反应结果表明DNA疫苗PBN和PBC均可引发机

5、体产生体液免疫和细胞免疫且PBN引发的细胞免疫强于体液免疫PBC引发的体液免疫强于细胞免疫但DNA疫苗产生的体液免疫弱于猪囊虫纯化抗原引发的体液免疫强于猪囊虫纯化抗原引发的细胞免疫关键字猪囊尾蚴AgB氨基端基因AgB羧基端基因猪CD58基因DNA疫苗1新疆农业大学硕士学位论文AbstractInoculationofcysticercuscellulosaeAgBrecombinantorDNAvaccinecanefficientlypreventmouseorpigfrominfectingofTaeniasoliumhasbeenproveda

6、smanyresearchesinbothChinaandabroad.Inthisstudy,totalRNAwasextractedfromperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)stimulatedbyConA,andthenan800bpspecificfragmentwasamplifiedbyreversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)usingspecificprimers,andclonedintothevectorslater.Thepos

7、itiveclonescontainthecompleteopenreadingframe(ORF)oftheCD58genewasidentifiedbyrestrictionendonucleaseanalysis,polymerasechainreaction(PCR)andsequencing.ComparedthenucleotideandaminoacidsequenceswiththesequencespublishedinGenBank,thehomogeneitywas99.4%and99.2%respectively.Firstl

8、yCD58wasinsertedintothecontrolofEF-1ápromoterofeukaryo