猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析

《猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号••R383.34单傳代码：10660UDC：636.09孛号:10660S120166学科专业代码:100208密级：公开:贵阳医学院2015居硕士学位论文(科学学位）猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析ProkaryoticexpressionandimmunoreactiveanalysisoftheAnnexinfromCysticercuscellulosae研究生:钟树怀导师：黄韻祝教授方文教杈年级：2012级专业：临床检验诊断学◦一五年五月贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取

2、得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研宄己发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名（手写）：M仲'个导师签名（手写）：wy年月為日>〇丨（年孓月讣日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权贵阳医学院可以将本学位论文的全部

3、或部分内容编入有关数据库进行检索，可以米用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“v”）：1、保密□，在_年解密后适用本授权书。2、不保密5^作者签名（手写）：导师签名（手写)年r月vu曰2,0年了月中图分类号：R383.34单位代码：10660UDC：636.09学号：10660S120166学科专业代码：100208密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文（科学学位）猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析ProkaryoticexpressionandimmunoreactiveanalysisoftheAn

4、nexinfromCysticercuscellulosae论文作者：钟树怀指导教师：黄韻祝教授方文教授申请学位：医学硕士培养单位：医学检验学院学科专业：临床检验诊断学研究方向：疾病蛋白质组学研究起止日期：2014年3月至2015年4月论文评阅人：盲评答辩委员会主席：钱民章教授论文答辩日期：2015年5月21日二〇一五年五月猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析专业：临床检验诊断学硕士研究生：钟树怀导师：黄韻祝教授方文教授【摘要】目的：对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达，对表达产物进行免疫反应性分析。方法:通过DNA自动合成仪，用固相亚

5、磷酸酰胺法合成一段5’端有NdeⅠ内切酶位点，3’端有XhoⅠ内切酶位点的猪囊尾蚴AF239799-1基因序列，并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中，将其转入到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中，经PCR、双酶切及基因测序鉴定，确定阳性克隆菌。用1.0mMIPTG对阳性克隆菌进行诱导表达，用SDS-PAGE（十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）对表达产物进行鉴定，并用蛋白质印迹法对纯化后的重组蛋白进行免疫反应性分析。结果：合成的基因序列长度为1053bp，AF239799-1重组蛋白为370个氨基酸，理论分子质量、等电点分别为40.39kDa和6.33；PC

6、R、双酶切及基因测序鉴定结果显示，pET28a(+)-AF239799-1重组质粒构建成功，并成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)中；重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达；Westernblot结果显示重组蛋白可被猪带绦虫病猪血清识别。结论：猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因可在原核表达体系中获得高效表达，表达产物具有免疫反应性。【关键词】猪囊尾蚴；膜联蛋白；原核表达；免疫反应性IIProkaryoticexpressionandimmunoreactiveanalysisoftheAnnexinfromCysticercuscellul

7、osaeMajor:ClinicalLaboratoryDiagnosticsPostgraduate:ZhongShu-huaiSupervisor:ProfessorHuangYun-zhuProfessorFangWen[Abstract]Objective:ToexpressAF239799-1geneofCysticercuscellulosaeandanalyzeitsimmunoreactivityofexpressionproducts.Methods:TheAF239799-1genefromCysticercuscellulosaewassy