sirna抑制znf139对人胃癌裸鼠原位移植瘤及转移淋巴结的蛋白质组学研究

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2、中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：、’7律己导师签章：知≥年弓月订日目录lllllIIIlLllllllllllULIIILIILILILIIlllY2337145中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·5研究论文siENA抑制ZNFl39对人胃癌裸鼠原位移植瘤及转移淋巴结的蛋白质组学研究前言⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··lO日U吾⋯⋯⋯”“””””“⋯⋯⋯

3、”⋯⋯⋯⋯⋯⋯””⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯””lU材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯n结果⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··21附图⋯⋯⋯·······⋯····⋯···⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯”·23附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··37讨{念⋯”·⋯····⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯·······⋯··⋯⋯⋯”4l结论⋯⋯⋯·⋯···⋯·⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯·⋯⋯·⋯⋯·⋯··44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·00O

4、OOl45综述RNA干扰技术在胃癌中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”48致谢⋯⋯⋯⋯·⋯···．．“····-·⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯··-··⋯········⋯········⋯61个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62中文摘要siRNA抑制ZNFl39对人胃癌裸鼠原位移植瘤及转移淋巴结的蛋白质组学研究摘要目的：胃癌是世界最常见的恶性肿瘤之一，死亡率高，居消化系统恶性肿瘤首位。本实验室前期发现ZNFl39的异常表达与胃癌的发生发展、侵袭转移、增殖凋亡等密切相关，本实验以胃癌SGC7901细胞原位移裸鼠模型为对象

5、，通过荧光双向差异凝胶电泳(2D．DIGE)结合液质联用(LC．MS)等蛋白质组学技术研究抑制ZNFl39对胃癌的原发灶和转移灶的影响，为ZNFl39参与胃癌转移调控机制提供依据。方法：l合成针对ZNFl39的小干扰RNA(s龇-ZNFl39)，以siRNA—ZNFl39质粒对胃癌细胞系SG-C7901(中分化腺癌)进行转染，转染完成后甩(3418筛选。’体外培养对数生长期SGC7901细胞，以siRNA-ZNFl39质粒对其进行干扰，qRT-PCR检测不同浓度siRNA．ZNFl39干扰质粒抑制率，使用G418对干扰后细胞株进行筛选，得到最适浓

6、度干扰细胞系。2建立人胃癌原位移植裸鼠模型体外收集经G418筛选siRNA-ZNFl39质粒转染胃癌细胞、阴性质粒转染胃癌细胞及普通SGC．7901细胞，接种至裸鼠皮下，皮下瘤鼠间传代5次。将第六代皮下瘤剪成约lmm3大小瘤块，用OB生物胶粘贴法进行裸鼠原位移植。成瘤后每4天测量原位瘤长短径，待直径约1．0cm左右时，脱颈处死裸鼠，取出原位移植瘤、腹腔肿大淋巴结。每个标本一分为三，两份迅速置液氮灌中保存，一份用福尔马林固定送病理检查。3应用荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术分别分离siRNA-ZNFl39干扰前后胃原位移植瘤及腹腔转移淋巴

7、结蛋白质，选定差异点后，用Ettanspotpicker挖取，并行胶内酶解，应用液质联用(LC．MS)质谱鉴定技术对挖取的蛋白质点鉴定，并对鉴定出的蛋白质进行分析。4应用Westernblot方法验证裸鼠原位移植瘤组织及腹腔转移淋巴结中差异蛋白质的表达，检测是否与蛋白质组学结果一致。中文摘要结果：1siRNA-ZNFl39质粒转染胃癌SGC7901细胞后ZNFl39mRNA表达的变化qRT-PCR检测显示在o,g／m、0．4}tg／p．1、0．6心山、o．8rted山、1．01ag／Ⅲ重组质粒转染后的SGC7901细胞中ZNFl39mRNA相对表

8、达量分别为1．0020a：0．0765，0．6788士0．1032，0．3691士0．0242，0．17114-0．0133，0．288