沙眼衣原体tarp蛋白b细胞表位预测及其生物学特性的研究

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1、万方数据论文题目：迦腿壅厦笠坠业蛋自曼绁胞麦鱼亟测区墓生塑堂鳖丝趁硒究答辩委员会主席：芒查答辩委员会成员：全胜逮篚囱田万方数据目录英文缩写词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．一5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8刚吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．第—部分：沙眼衣原体Tarp蛋白B细胞表位的预测及鉴定栩料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结

2、果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16：口木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··lu分析与挖⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一22第二部分：免疫优势B细胞表位(aal71．186)单克隆抗体的制备栩悄方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一24结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31：口木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一j1分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35第三部分：免疫优势B细胞表位(aal71．186)免疫保护效

3、应研究栩料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42；口木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·斗z分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．47总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54万方数据万方数据温州医科大学硕士学位论文英文缩写词万方数据沙眼衣原体Tarp蛋白B细胞表位预测及其生物学特性的研究中文摘要

4、目的：(1)预测并鉴定沙眼衣原体(Ct)Tarp蛋白的B细胞表位，为深入研究Tarp蛋白的生物学特性及其表位疫苗的研制打下基础。(2)制备沙眼衣原体(o)Tarp蛋白免疫优势B细胞表位的单克隆抗体，为进一步验证该表位的活性功能奠定基础。(3)研究沙眼衣原体(Ct)Tarp免疫优势B细胞表位对雌性BALB／c小鼠生殖道沈攻击的免疫保护效应。方法：(1)利用生物信息学软件综合分析、预测筛选E血清型oTa叩蛋白的B细胞表位，获得六个潜在目的表位。将人工合成的表位肽段与弗氏佐剂完全乳化，经背部皮下途径分多点注射BALB／c小

5、鼠(10099／只／次)，间隔2周，共免疫3次。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测免疫小鼠血清中特异性抗体IgG及其亚类lgGl、lgG2a，以及阴道分泌物中特异性slgA抗体；进一步采用间接免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Westernblot验证表位肽免疫血清IgG与内源性Tarp蛋白的结合能力。(2)利用杂交瘤抗体技术制备Tarp免疫优势B细胞表位的单克隆抗体(mAb)，ELISA法筛选阳性克隆，并测定单克隆抗体的效价；同时，采用免疫沉淀和Westernblot检测单克隆抗体与Tarp蛋白的结合能力，进一步采用

6、竞争性ELISA检测mAb与天然Tarp蛋白和Tarp免疫优势B细胞表位肽的竞争性结合能力。(3)将人工合成的Tarp免疫优势表位肽段经弗氏佐剂完全乳化后，经背部皮下途径分多点注射BALB／cdx鼠，同时设置灭活。免疫阳性对照组和PBS免疫阴性对照组，采用隔周免疫程序，共免疫3次。采用体外中和实验检测表位免疫血清中和。感染HeLa229细胞的活性。每组小鼠末次免疫后1w，分别皮下注射醋酸甲羟孕酮，1w后，以20rtL(1x106IFU／mL)Ct经生殖道途径攻击小鼠。感染后，每天观察小鼠外阴炎症、生殖道Cf清除情况，

7、以及生殖道组织病理切片等分析判断Tarp免疫优势表位肽段免疫后对小鼠生殖道的保护效应。2万方数据温州医科大学硕士学位论文结果：(1)筛选并鉴定了Tarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位F4(aal71．186)，该表位可以刺激小鼠产生较高水平的血清特异性IgG抗体，免疫后第4周和第6周，F4合成肽组血清特异性IgG抗体水平与其他组统计学比较，均值分别为0．27+0．04、0．62+0．05，差异均具有统计学意义(F=20．93，P<0．05、F=46．66，P<0．05)；且末次免疫后2周检测小鼠血清中IgG亚类水平，结

8、果分析显示，血清抗体亚类以IgGl为主，F4合成肽组血清特异性IgGl抗体与其他组比较，均值为0．24+0．03，差异具有统计学意义(F=24．43，P