let-7c在非小细胞肺癌增殖和顺铂耐药中的作用研究

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1、中图分类号UDC博士学位论文学校代码10533密级公开Let．7c在非小细胞肺癌增殖和顺铂耐药中的作用研究TheRoleofLet--7cinNon·—smallCellLungCancerProliferationandCisplatinResistance学科专业：作者姓名：研究方向：学院(系、所)：指导教师：药理学湛敏临床药理学和遗传药理学临床药理研究所周宏灏院士论文答辩日期_?l_I_l丫答辩委员会主席型中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研

2、究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：超丛日期：竺L年』月三日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它

3、手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。雠名：监新签凋幺赢：丛年』月互日博士学位论文中文摘要摘要肺癌是目前恶性肿瘤中居于首位的致死原因，近年来其发病率和死亡率有上升的趋势。肺癌可分为非小细胞肺癌(non．smallcelllungcancer，NSCLC)和小细胞肺癌(smallcelllungcancer，SCLC)两大类，其中NSCLC和SCLC分别约占80％幂n20％。大多数NSCLC患者就诊时己至晚期

4、(IIIB期和Ⅳ期)，失去手术机会。目前，不能手术治疗的NSCLC患者的首选治疗方案是以铂类为基础的联合化疗。尽管NSCLC的早期诊断和规范化治疗都取得了一定的进步，但目前的五年生存率仍然仅为约15％，即使是早期的病例，其复发率仍然很高。缺乏早期诊断的方法和耐药率高是NSCLC患者预后差的主要原因，因此阐明NSCLC发生发展和铂类耐药的分子机制，对于提高患者的生存率和改善预后具有重要意义。MicroRNAs(miRNAs)表达失调目前已经被发现在不同肿瘤中调控肿瘤细胞生存和药物反应，包括NSCL

5、C，显示miRNAs在肿瘤的诊断和治疗中的重要作用。miRNAs是一类在种系之间高度保守的非编码单链RNA，长约19．23nt，主要通过靶向信使核糖核酸3’非翻译区(messengerribonucleicacid3’untranslatedregion，mRNA3'UTR)而导致翻译抑制或mRNA降解，从而发挥其调控作用。目前的研究已经发现，miRNAs表达失调在人类肿瘤中是一个普遍的现象。很多肿瘤抑制基[因(tumorsuppressorgenes，TSGs)幂I癌基[](oncogene)

6、可以被miRNAs调控，相应地这些miRNAs发挥癌基因或者抑癌基因的作用，调控癌细胞生存和生长。此博士学位论文中文摘要外，miRNAs也可以调控肿瘤细胞对化疗药物的反应。因此，上述研究显示，miRNAs是肿瘤发生发展和药物反应的重要调控因子，形成了一类新的诊断标记物和治疗靶点。NSCLC中miRNAs表达的研究显示了它们在这一领域的重要性和潜在用途。一些miRNAs，如miR-21、let．7、miR-34和miR-145等已经被证实在NSCLC中发挥重要的调控作用。Let．7作为人类细胞中发

7、现的第一个miRNA，表达下调可见于肺癌、卵巢癌、前列腺癌和结肠癌等多种肿瘤组织和细胞株，并可通过调控细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力而参与肿瘤的发生发展，其表达与预后和对化疗药物的反应相关。目前，关于let．7c在NSCLC中的作用及其可能的机制研究还很少。本研究的目的在于探讨1et．7c在NSCLC增殖和对顺铂耐药中的作用及可能的机制，以期为发展基于let．7c的治疗方法提供理论基础。第一章Let．7c通过靶向HOXAl抑制NSCLC增殖目的：探索1et．7c抑制NSCLC增殖的分子机制方法：实

8、时荧光定量PCR(quantitativereverse．transcriptionPCR，qRT-PCR)检测let-7c表达水平；A549和H1299细胞转染1et一7cmimics以恢复let．7c的表达。MTS实验、克隆形成实验和细胞周期分析评价let．7c对NSCLC细胞增殖和细胞周期的影响。裸鼠成瘤实验评价let．7c博士学位论文中文摘要对H1299细胞体内成瘤能力的影响。qRT-PCR和Westemblot检测let．7c对靶基因的调控作用及可能的下游机制。荧光素酶报告基因实验进一