用hplc法测定肾移植病人的全血环孢素浓度

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1、用HPLC法测定肾移植病人的全血环孢素浓度卓海通（南京军区南京总医院）环孢素（CyclosporineA,CsA)是一种动相：(1)CH3CN:CH3OH:H2O(50:0:50);重要的免疫抑制剂药物。它用于器官移植，（2）35:15:50;（3）25:25：50;（4）15:35:可延长移植后器官的成活率、预防移植器50;(5)0:50:50流速1.05ml/min。柱温比官的排斥反应，但CsA的血药浓度与疗效和较了41、46、51、55四种。毒副反应密切相关。监测血药浓度对提高安（二）标准溶液及标准曲线精密称取全有

2、效的用药至关重要。10mgCsA用甲醇配制成100g/ml浓度的贮目前CsA的测定方法有RIA⒂萤光偏振备液，分装于安瓿中置-40℃备用。免疫(TDX)、放免单克隆抗体等法[13]。但工作标准溶液：取上述贮备液用流动相这些方法易受代谢物影响，产生交叉反应[]，配制成50ꈱ100ꈲ200ꈴ400ꈸ800ꈱ1600ng/ml浓且分析精度也不如HPLC法好[4]。用HPLC度标准溶液，按峰高或峰面积与浓度求算直法测定CsA血药浓度国外已有报道[57]。但线回归方程。几乎都用C8或C18柱分析，以乙腈婊或甲醇与（三）血样采集和样

3、品处理分别在口水二元溶剂为流动相，使用柱温(7079℃)。服CsA后取其谷和峰时的血样作为常规监国内对CsA的分析方法报道甚少，并选用测。做药代动力学取样为给药后2ꈳ3479、C18或C8柱[8,9]。本文选用极性较大的CN12h血，测定其各时间点药物浓度，按PKBP柱，使柱温降到45ꬵ55℃妫，这样可提高柱寿-N1程序包中程序拟合和计算药代动力学模命30％，用乙腈、甲醇、水三元溶剂可提高型及参数。柱效、增加灵敏度2倍。本法已用于肾移植血样处理（1）取肝素抗凝全血2ml，加病人的血药浓度监测和药代动力学研究。2ml0.

4、025mol/LNaOH곐旋转混匀30s使其溶血；（2）加入5ml无水乙醚提取两次，乙醚实验部分提取液在45℃空气下吹干；꠳3）残渣中加入（一）仪器和试剂贝克曼114M泵，0.025mol/LHC1和甲醇各2ml곈溶解后加入427积分仪和210A进样阀，ZW-001型可变正己烷5ml洗涤两次；（4）在上述水相中加波长紫外检测器（南分厂）、波长210nm，入2ml0.025mol/LNaOH和4ml乙醚提取两恒温水浴器（精度±쀰0.1℃，西德Haake次，醚提取液在45℃空气下吹干。残渣用产）。100l流动相溶解后进样20

5、l，按外标法峰甲醇、乙醚、己烷、盐酸、氢氧化钠均高定量。为AR.级试剂，乙腈为HPLC纯，环孢素实验结果(SandozBasleSwitzerland)。色谱条件：1．柱UltrasphereOctyl（一）CsA在不同柱上的色谱特性。比5μ蘭m4.6섲250mm，柱温60，流动相：CH3较了C8和CN柱上对CsA的保留时间（tRꦡ、CN:CH3OH:H2O(56:22:22)；2.柱Ultras-峰高(H)、半峰宽(W1/2和理论塔片数(N)phereCN5m4.6섲250mm，柱温50妫，流的影响。结果如表1。表1C

6、sA在C8和CN柱上的色谱特性数，但随甲醇量增加tR延长，HꉎN显著降低。（三）在CN柱上不同柱温对CsA的色谱特性的影响。在（2）号流动相条件下，分别在41465155℃柱温时对CsA的tR、H、W/2和N和的影响，结果如表3。表3不同柱温对CsA色谱行为的影响表1结果说明，CN柱优于C8柱，N提高近3倍，H增高近2倍。降低柱温可延长使用寿命，而在C8柱上当柱温<50℃时CsA的tR>30min。图1A为服药前空白血色谱图，B为服CsA后3h的血药浓度色谱图。（四）回收试验和精度试验1．分别对164205410ng/m

7、l三个浓度CsA血样进行回收试验，其平均回收率98.43±3.71％。结果见表4。表4CsA回收试验结果2.精度试验：分别对102、205、410ng/ml三个浓度在日内(n=5)和日间(n=7)进行测定，求算其CV分别为2.02％和2.83%。（五）干扰试验：对肾移植病人常用的（二）在CN柱上不同流动相组分对巯唑嘌呤和强的松在同样条件下不干扰CsACsA色谱行为的影响，结果列于表2中。检测。它们的tR为2.90和3.84min。表2结果说明（2）号流动相最理想。流（六）病人血样监测：对8例肾移植病动相中加入少量甲醇可改

8、善分离度，增加N人共监测血药浓度303次，峰浓度652.8±表2不同流动相组分对CsA色谱特性的影响158.3ng/ml，谷浓度121.9±43.1ng/ml。并进行药代动力学研究。图2为病人的药-时曲线图。讨论（一）采用CN柱和三元溶剂系统测定CsA是值得推广的。流动相中加入醋酸盐或Proceedingsvolxx