新型原位聚合酶链反应在检测肝组织中hbv cccdna的临床应用价值研究

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1、分类号学校代码10601密级公开编号Y0901024硕士学位论文新型原位聚合酶链反应在检测肝组织中HBVcccDNA的临床应用价值研究学科专业:病理学与病理生理学传染性疾病的病理学诊研究方向:断与免疫防治研究生姓名:周冬青学号:Y0901024学位类型科学学位导师姓名:钟彦伟教授二O一二年四月I独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特

2、别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日----------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数

3、据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日II目录中文摘要……………………………………………………………1ABSTRACT…………………………………………………………5符号说明………………………………

4、……………………………8前言…………………………………………………………………111材料与方法………………………………………………………131.1研究对象…………………………………………………………131.2主要试剂…………………………………………………………131.3主要仪器及耗材…………………………………………………141.4乙肝肝组织的病理分级、分期及免疫组化检测………………141.5组织切片的处理及PSAD酶消化………………………………191.6半套式直接原位PCR技术检测肝组织HBVcccD

5、NA的方法…201.7新型原位PCR技术检测肝组织HBVcccDNA的方法………201.8信号检测…………………………………………………………221.9HBVcccDNA检测结果的判定…………………………………221.10阴性对照………………………………………………………222结果………………………………………………………………232.1乙肝肝组织的病理分级、分期及免疫组化检测结果…………232.2半套式直接原位PCR技术检测HBVcccDNA结果…………242.3新型原位PCR技术检测HBVcccD

6、NA结果…………………252.4不同原位PCR方法结果比较及图像分析……………………273讨论……………………………………………………………294结论……………………………………………………………33III参考文献……………………………………………………………34综述…………………………………………………………………38攻读学位期间发表的学术论文目录………………………………48致谢………………………………………………………………49IV新型原位聚合酶链反应检测肝组织中HBVcccDNA的临床应用价值研

7、究中文摘要乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus,HBV）感染是呈世界性流行，据世界卫生组织统计，全球大概有3.5亿HBV携带者，其中约有10％发展为慢性乙型肝炎（ChronichepatitisB,CHB）进而发展为肝硬化、肝衰竭以及原发性肝癌等严重的并发症，每年约有28万人死[1]于HBV感染相关性疾病。HBVcccDNA又称乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA，是HBVDNA复制的中间体，亦是HBV前基因RNA复制的模板，只有彻底清除HBVcccDNA,才能真正清除乙肝病毒,因此HBVcccDN

8、A的检测对研究乙型肝炎致病机制和评价抗病毒药物的疗效及新药的研发等方面具有重要的意义。利用PSAD（质粒安全ATP依赖DNA酶）消化、原位滚环扩增（RCA）等方法进行原位PCR检测肝组织中的HBVcccDNA是目前来说较新的一种原位PCR方法，与液相PCR相比不需从肝组织中提取DNA只需在组织切片上即可进行原位扩增，与southern相比，不需要电泳、转膜等一系列复杂的操作步骤，与原位杂交相比，可以将低拷贝的HBVcccDNA通过扩增检测出来，与传统的一