灯盏乙素及其苄酯衍生物对心肌细胞缺氧损伤保护作用及机制的研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺承担相应的法律责任。．。⋯、研究生虢状钳新裤韶乞鬟纂≥研究生签名：戗自丧．导师签章俗歇矽#放学院领导签章：；≯口f『年6月，2．，‘日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：代能翩獭私乞乡硎年谚舌月力日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文灯盏乙素及

2、其苄酯衍生物对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及机制研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7日¨舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’7材料与方法⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55综述Bcl．2

3、家族对细胞凋亡的调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯69中文摘要灯盏乙素及其苄酯衍生物对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及机制研究摘要目的：研究灯盏乙素及其苄酯衍生物对体外培养心肌细胞缺氧损伤的保护作用，并探讨其可能机制。方法：l采用新生1～3d的SD大鼠体外原代培养心肌细胞。2采用MTT法检测不同缺氧时间心肌细胞的生长状态，从而确定最佳缺氧时间，建立体外缺氧损伤模型。3将搏动状态良好，生长密度无明显差异的心肌细胞随机分为正常对照组、缺氧损伤模型组、灯盏乙素组(高

4、、中、低剂量组：100岬ol／L、50岬ol／L、25岬ol／L)和灯盏乙素苄酯衍生物组(高、中、低剂量组：loo岬ol／L、50岬ol／L、25岬ol／L)(缺氧前分别加入干预药物)。4缺氧处理后，采用生化手段检测各实验组培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(N0)活性，研究灯盏乙素及其苄酯衍生物对心肌细胞膜缺氧损伤的保护作用。5检测各实验组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量，研究灯盏乙素及其苄酯衍生物对心肌细胞脂质过氧化损伤的保护作用。6采用H．E及Hochest．PI染色观察灯盏乙素及其苄酯衍生物对缺氧心肌细胞形态结构的影响

5、。7采用流式细胞术，研究灯盏乙素及其苄酯衍生物对缺氧诱导心肌细胞凋亡率的影响。．8采用RT．PCR技术检测各实验组Bcl．2、Ba)【、Cytochromec、Caspase．3基因在mRNA水平的表达差异。9通过WbstemBlot法检测各实验组Bcl．2、Bax、Cytochromec、Caspase．3基因在蛋白水平的表达差异。结果：1缺氧时间点的确定：心肌细胞缺氧损伤O．6h，细胞活性变化幅度最大，中文摘要单位时间内细胞缺氧损伤程度最大，确定6h为最佳缺氧时间点。2生化指标测定：与正常对照组比较，模型组心肌细胞LDH的外漏量增加(P

6、尸

7、检测：与正常对照组比较，模型组心肌细胞凋亡率显著升高(氏O．01)，各剂量的灯盏乙素及高、中剂量的苄酯衍生物可明显降低缺氧损伤细胞凋亡的百分率(尸