南方鲇dmrt1及其亚型cdna的克隆和表达的研究

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1、V902037单位代码j业堑一学号』丛盟§旦l西南虫学硕士学位论文南方鲇Dmrtl及其亚型cDNA的克隆和表达的研究论文作者：刘智皓指导教师：王德寿教授学科专业：水生生物学研究方向：鱼类分子内分泌提交论文日期：2006年6月I曰论文答辩日期：2006年6月lO日学位授予单位：西南大学中国·重庆2006年6月独创性声明X902037本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西南大学或其他教育机构的学位或

2、证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者：未11智b彦签字日期：一，矽∥年∥月，日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：曰不保密，口保密期限至年月止)。学位论文作者签名：剀智

3、准签字日期：≯邪多年占月，．日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：导师签名：刁河彩签字日期：声卵莎年石月j．--日电话邮编南方鲇1)mrtl及其亚型全长eDNA的克隆和表达的研究专业硕士研究生刘智皓指导教师：王德寿内容摘要本研究采圳RT-PCR与SMARTRACE相结合的方法从南方鲇(Silurusmeridionalis)克隆得至JJDmrtl及其亚型全长cDNA。南方自diDmrtl(SoutherncatfishDmrtl，ScDmrtl)cDNA全K=1347bp，包括一个编／i-B295个氨基酸的开放阅读框、一个加尾信

4、号(AATAAA)和一个poly(A)尾巴。scDm，f，亚型cDNA全长1513bp，包括一个编码271个氨基酸的开放阅读框和一个poly(A)尾巴。ScDmrtl．7及其Ⅱ型含有所有DM基因具有的典型特征——DM—domain。序列对比发现scDmrtl及其Ⅱ型与革胡子鲜iDmrtl最相似，它们同属D，Hr，卜一类群．区别于Dmrt2—8。在对scDmrtl及其弧型的序列分析中发现，它们只有3’末端有区别．而在5’端则完全相同。冈此我们推；’坝tJscDmrtl弧型是由于其前体mRNA在3’末端通过选择性剪切产生的。同时，通过扩增s

5、cDmrtl基因第4、5个内含子的片段萃“对其它脊椎动物Dmrtl基网结构的分析，我们推剃UscDmrtl基因可能禽有6个外显子，区别于其它脊椎动物的5个外显子。测序结果表明扩增片段中包含了属丁第4和第5个外显子部分和内含子的供体位点(gt)和受体位点(ag)。冈此我们推测scDmrtl的剪接模式不同于scDmrtl型，其产生是由于将scDmrtl前体mRNA剪切掉了第5个外显子，并拼接上最后一个外显子形成，而其亚型则由其前5个外显子拼接而成。另外，我{门对scDmrtl及其亚型在南方鲇备组织中的表达进行了研究。研究表明scDmrtl及

6、其弧型在精巢和卵巢均有表达，表达量都是精巢高于卵巢。尤其是scDmrtl亚型在精巢的表达远远高于卵巢。ScDmrtl为雌雄性腺特异表达，而其弧裂高表达于性腺，同时在雄鱼微弱表达丁肠和肾脏。用雌激素E2、芳化酶抑制剂Fadrozole和雌激素受体拮抗剂Tamoxifen对孵化后(daysafterhatching，dab)5天的南方鲇仔鱼进行浸浴处理20天。65dah时的检测表明在Fadrozole处理组和Tamoxifen处理组，scDmrtl及其弧型的表达上调，而E2组荆I对照组没有scDmrtl2及其弧刑的表达。研究同时发现Fadr

7、ozole牙『JTamoxifen同对处理组scDncrtI及其厢刑冉勺表达没有明显上调。在对芳化酶表达的研究中，我们发现Fadrozole、Tamoxifen处理编和Fadrozole和Tamoxifen同时处理组卵巢型芳化酶的表达均铍下凋，而脑刑芳化酶的表达没有明显变化。组织学观察表明，Fadrozole处理组的卵巢出现了一定程度卵母细胞的退化和生殖上皮的增生t并发现存在有丝分裂中的性母细胞。研究表明．F组个体的卵巢可能正处于从向精巢转变的过样中。本研究在65dah没有得到雄鱼。关键词：南方鲇Omrtl亚型选择性剪切诱导性逆转芳化酶

8、表达MolecularcloningandexpressionoftheDmrtlandisoformcDNAsinSilurusmeridionalisLiuzhi．haoSupervisedbyProf