fabp4表达变化在hcy诱导thp-1单核细胞源性巨噬细胞胆固醇聚积中的作用及其机制的研究

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1、分类号:R4单位代码:10752密级:公开学号:2010151宁夏医科大学硕士研究生学位论文FABP4表达变化在Hcy诱导THP-1单核细胞源性巨噬细胞胆固醇聚积中的作用及其机制的研究FABP4mediateshomocysteine-inducedcholesterolaccumulationinTHP-1monocyte-derivedmacrophagesandthepotentialepigeneticmechanism学位申请人:梁宇指导教师:姜怡邓申请学位门类级别:医学专业名称:临床检验诊断学研究方向:动脉粥样硬化分子生物学所在学院:检验学院论文完成日期:二〇一

2、三年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeFABP4mediateshomocysteine-inducedcholesterolaccumulationinTHP-1monocyte-derivedmacrophagesandthepotentialepigeneticmechanismStudent’sName:LiangyuSupervisor:JiangyidengSubjectCategory:MedicineMajor:ClinicalLaboratoryD

3、iagnosticsSpecialty:MolecularBiologicalDiagnosisofAtherosclerosisCollege:InsituteofLaboratoryMedicineCompletionDate:Apr.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承

4、担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文,同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要FABP4表达变化在Hcy诱导THP-1单核细胞源性巨噬细胞胆固醇聚积

5、中的作用及其机制的研究摘要目的同型半胱氨酸血症(homocysteinemia,Hcy)已被公认为是致动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的独立危险因子。本课题探讨同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)及其拮抗剂叶酸(folicacid,FA)、维生素B12(vitaminB12,VB12)干预下,THP-1单核细胞源性巨噬细胞内脂代谢相关基因脂肪酸结合蛋白4(fattyacidbindingprotein4,FABP4)mRNA、蛋白表达的变化和FABP4DNA甲基化水平的改变,及对总胆固醇(totalcholesterol,TC)、氧化低密度脂

6、蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL)、内质网应激相关蛋白含量的影响,明确Hcy对THP-1单核细胞源性巨噬细胞形成中FABP4表达及其DNA甲基化调控的影响。通过对FABP4基因采用基因重组技术对调控通路关键靶点进行干预,深入观察FABP4对THP-1巨噬细胞内脂质积聚的影响。为FABP4及其DNA甲基化对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的早期分子诊断及防治提供新的理论依据,也为检验医学的发展提供一个崭新的视角。62方法培养THP-1单核细胞,以4×10个接种于25cm培养瓶,加入5ml含500nM佛波酯(ph

7、orbol12-myristate13-acetate,PMA)的培养液,37℃、5%CO2培养48h,显微镜下观察显示此时细胞形状不规则并有伪足伸出,呈贴壁状态,证实其已分化为巨噬细胞,弃去旧培养液并用pH7.4的磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferedSaline,PBS)冲洗2-3遍,更换为含50、100、200、500MHcy、100MHcy+叶酸(FA)+维生素B12(VB12)的15%胎牛血清的RPMI-1640培养基作为实验组,培养24h,以不加Hcy组(0MHcy)为对照组,并设置pc