10-23脱氧核酶沉默survivin基因诱导hlecs凋亡的实验研究

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1、目录110—23脱氧核酶沉默Survivin基因诱导HLECs凋亡的实验研究⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯311．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一321．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯382致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393后发性白内障基因治疗的研究进展(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40进趔匡堂医亟主堂鱼迨塞lUlIIIIIIIIIIIIIllllllllllll／11111一Y26022201O一23脱氧核酶沉默SurvIVn基因诱导HLEOs凋亡的实验研究摘要目的：设计针对生存素mRNA(SurvivinmRNA)序列的特异性10-23脱氧核酶(10—23DNkzyme)，通过脂质体介导Survivin基因特异性10-23DNAzyme

3、转染到人晶状体上皮细胞(humanlensepithelialcells，HLECs)SRAOI／04细胞株，探讨沉默Survivin基因对SurvivinmRNA表达及HLECs凋亡的影响，为后发性白内障的预防及治疗提供实验依据及新方法。方法：体外培养HLECs永生系SRAOI／04，将细胞分为3组，空白对照组：HLECs+完全培养基；阴性对照组：HLECs+脂质体+非特异性10—23DNAzyme；实验组：HLECs+H旨质体+特异性10-23DNAzyme。利用反义技术，以脂质体为载体分别将特异及非特

4、异10一23DNAzyme转染至HLECs内，HLECs转染24h及48h后，采用倒置相差显微镜观察HLECs的生长状态及HLECs的形态改变。HLECs转染48h后，运用RT—PCR联合灰度扫描半定量方法检测HLECs中SurvivinmRNA的表达情况，运用流式细胞仪(FCM)联合膜联蛋白V／PI(AnnexinV／PI)双染法来检测HLECs的凋亡率。结果：运用倒置相差显微镜观察，转染24h后空白对照组、阴性对照组的HLECs细胞呈椭圆形或类圆形，均匀分散贴于培养瓶底，细胞的胞体无色透亮，胞浆丰富，细

5、胞内含有粗细不一致的及排列紧凑的颗粒，少部分细胞胞体伸出凸起，与其它细胞凸起相连。48h后，细胞增多，细胞间隙减小，胞体伸出的凸起变少，呈类圆形。实验组的HLECs转染24h后，细胞开始变圆，染色质凝聚，胞质浓缩；转染48h后，部分细胞已经裂解成形态不，1类圆形的凋亡1小体，有的细胞已经脱离培养瓶底，漂浮在培养液中。转染48h后RT—PCR法联合灰度扫描半定量检测结果示：在空白对照组、阴性对照组及实验组中，HLECs的SurvivinmRNA相对表达量分别为：0．726±0．148、0．700±0．115及

6、0．314±0．130。实验组SurvivinmRNA的相对含量分别和空白对照组及阴性对照组相比较，分别降低了56．75％币H55．14％，差异具有明显统计学意义(Y=0．000(0．05)。空白对照组及阴性对照组的SurvivinmRNA的相对含量相比较无统计学差异(P=-0．055>O．05)。流式细胞仪联合v／PI双染色法结果显示：HLECs转染48h后，空白对照组HLECs凋亡率为2．33±0．23％，阴性对照组HLECs凋亡率为3．57±0．20％，两组细胞之间HLECs凋亡率差异无统计学意义(P

7、=-0．072)0．05)。实验组HLECs凋亡率为19．52±1．16％，与空白及阴性对照组相比较，实验组HLECs的凋亡率明显增加，二者之问的差异具有统计学意义(P=-0．000<0．05)。结论：特异性10-23DNAzyme可以有效沉默Survivin基因，抑制HLECs中surivivnmRNA的表达；HLECs中Survivin基因表达下调可促进HLECs凋亡。关键词：10—23DNAzyme；survivin基因；人晶状体上皮细胞；细胞凋亡TheExperimentalstudyonapopt

8、osisofhumanlensepithelialcellsby10—23deoxyribozymesilencingSurvivingeneAbstract：Objective：Theexperimentaldesignspecific10—23DNAzymeforSurvivinmRNAsequences，Theliposome(Lipofectamine2000)mediatedspecific10—23D