mir-205对卵巢癌细胞生物学行为的影响

《mir-205对卵巢癌细胞生物学行为的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据中图分类号墅鱼UDC6lO硕士学位论文学校代码!Q§三三密级监IntR．205对箩日巢癌细胞生物学行为的影响EffectofmiR一205onBiologicalBehaviorinOvarianCancerCellsl5ancerells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系所)：指导教师：论文答辩日期型竺：篁：塑李龙基础医学病理学与病理生理学基础医学院吴晓英教授答辩委员会主席堑中南大学二O一四年五月学位论文原创性声明燃Y2黝sa耀sssl缪万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特

2、别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：—僵学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文

3、。保密论文待解密后适应本声明。日期：塑坠年』月堕日茗硇业万方数据miR-205对卵巢癌细胞生物学行为的影响摘要：背景：卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，在全球女性妇科肿瘤中死亡率位列第二位。由于卵巢癌早期症状不明显，又尚未有有效的肿瘤标记物来进行预警和早期诊断，在进展期卵巢癌患者即使接受治疗，绝大部分五年生存率仍低于20％oJ。近年来，关于微小RNA(microRNA，miRNA)调控基因表达的研究成为肿瘤研究的新热点。微小RNA是长约19～25nt的单链非编码小分子RNA，它广泛存在于植物，非脊椎动物和脊椎动物中。miRNA在调节细胞分化，细胞周期，细胞

4、凋亡中均发挥着重要作用。目前有超过900种miRNA在人体中被发现【2】。miR一205定位于lq32．2，是一段．uccuucauuccaccggagucug．编码的microRNA，在不同种系中呈现高度保守性。miR．205作为肿瘤致癌基因或抑制基因取决于特定肿瘤环境中的靶基因表达。现已有研究证实在不同的癌细胞株中miR一205发挥着促进肿瘤或抑制发生发展的作用【3】。本课题组前期应用比较蛋白质组学研究发现有两种差异蛋白Ezrin和LaminA／C与卵巢癌侵袭转移相关。同时，应用生物信息学方法(3个独立软件TargetScan、DIANA．miroT、Pi

5、cTar)分别预测Ezrin、LaminA／C3'UTR有结合位点的miRNA，结果3个软件同时显示miR一205在Ezrin、LaminA／C的3'UTR均有结合位点。由此推测miR一205、差异蛋白Ezrin和LaminA／C间存在着调控关系，在卵巢癌侵袭转移中发挥着重要作用。本文旨在探究miR．205对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响，以及miR．205表达与差异蛋白Ezrin和LaminA／C间的关系。方法：(1)培养人上皮性卵巢癌细胞系HO．8910({氐转移株)、HO．8910pm(高转移株)、SKOV-3({k乇转移株)及SKOV-3ip(高

6、转移株)4株配对的细胞系。(2)Real．timePCR检测miR一205在四株细胞中的本底水平。(3)RealtimePCR检测瞬时转染miR．205mimics／inhibitor后四株细胞中miR一205的表达，验证是否转染成功。(4)Transwell迁移实验、侵袭实验比较细胞转染前后迁移和侵袭能力变化。(5)增殖实验(MTT法)比较各组细胞转染前后增殖能力万方数据差异。(6)平板克隆形成实验比较各组细胞转染前后克隆形成率变化。(7)WesternBlot检测转染前后靶蛋白Lamin～C、Ezrin的表达水平变化。结果：(1)在培养条件、接种数目、时间

7、相同情况下，HO．8910pm和SKOV-3ip比HO．8910和SKOV-3细胞数目多、生长速度快。(2)miR．205在HO．8910pm、SKOV-3ip中表达水平高于HO．8910、SKOV-3。(3)与miR一205control组相比，转染miR．205mimics后的HO．8910、SKOV-3中miR．205的表达水平上升(P<0．05)；转染miR．205inhibitor后的HO．8910pm、SKOV-3ip中miR．205表达水平下降(P<0．05)。(4)与miR．205control组相比，转染miR．205mimics后的HO．8

8、910、SKOV-3细胞迁移和侵袭能力