高糖对视网膜色素上皮细胞tlr2表达的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文高糖对视网膜色素上皮细胞TLR2表达的影响姓名：陈雪梅申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：张学东201205重庆医科大学硕士研究生学位论文高糖对视网膜色素上皮细胞TLR2表达的影响摘要目的：观察高糖对体外培养的ARPE一19细胞TLR2表达的影响及机制。(1)利用RealtimePCR技术探讨TLR2mRNA在不同D一葡萄糖浓度下培养人视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelialcell，RPE)中的表达。(2)利用Westernblot技术探讨不同D一葡萄糖浓度和PKC—

2、Q抑制剂对RPE细胞TLR2蛋白和PKC—Q从细胞浆向细胞膜转位情况的影响。(3)初步探讨TLR2与糖尿病视网膜病变(diabetesretinopathy，DR)的相关性，高糖对ARPE一19细胞TLR2表达的影响以及机制，为相关疾病的诊断治疗提供新的思路。方法：1．培养ARPE一19细胞。2．取第16～20代人RPE细胞用于实验，各组ARPE一19(RPE细胞系)细胞分别刺激48h，正常糖浓度组(5．5衄ol／LD一葡萄糖)、中度高糖组(15．5姗ol／LD一葡萄糖)、高糖组(25．5咖01／LD一葡萄糖)、PKC—Q抑

3、制剂组它5．5咖ol／LD一葡萄糖加lO衄ol／LG06976PKC—Q抑制剂)、高渗对照组(5．5姗ol／LD一葡萄糖加20mmol／L甘露醇)。3．Rea卜TimePCR分析各组ARPE—19细胞TLR2的mRNA表达水平。4．WesternB10t检测各组ARPE一19细胞TLR2蛋白表达水平，以及PKC—Q蛋白胞浆向胞膜的转位情况。结果：与正常糖浓度组ARPE一19细胞相比，高糖组ARPE一19细胞和中度高糖组ARPE一19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达，以及PKC—Q从细胞重庆医科大学硕士研究生学位论文浆向细胞膜

4、的转位均增加(P<0．05)，并且高糖组ARPE一19细胞高于中度高糖组ARPE—19细胞(P<0．05)。与高糖组ARPE一19细胞比较，PKC—Q抑制剂组ARPE—19细胞的TLR2蛋白表达降低(P

5、—Q从细胞浆向细胞膜转位，激活PKC—Q信号通路，来上调TLR2的表达。TLR2信号通路可能参与糖尿病视网膜病变的发生发展过程，为研究疾病的诊治提供新的思路。关键词：ARPE—19细胞；糖尿病视网膜疾病；TLR2；高糖4重庆医科大学硕士研究生学位论文EFFECTOFHIGHGLUCOSECONCENTRATIONONEXPRESSIONOFTOLLL刀已ERECEPTOR2lNARjfIE19CELLSABSTRACTPllrposeToobseⅣetheeffectofdifferentglucoseconcen仃atio

6、nsonexpressionoftoll—likereceptor_2(TLR-2)in趾冲E一19cells．MethodAI乙PE-l9cellswerediVidedinto5．5nm01／Lglucosegroup，15．5mm01／Lglucosegroup，25．5mm01／L91ucose，25．5mmol／Lglucose+10m】mol／LG06976PKC一0【inhibitiongroup，5．5nun01／Lglucose+20IIl】[IloⅥ一ma衄it01com01group．EXpressio

7、n1eVelofTLR-2i11ARPE一19cellsandtranslocationofPKC-仅矗omcytoplaSmtoc”omembraneweremeasuredbyWestemblotting，whilethatofTLR一2mRNAinARPE一19ceUswasmeasuredbyreal-tnePCR．1ksun111eexpressionleVelofTLR_2mRNAandthetranslocationofPKC一0【行omcytoplasmtocytomembranewerehigherin25

8、．5mmol／Lglucosegroupand15．5mmol／Lglucosegroupthanincon仃olgroup(√吣O．05)．TheexpressionleVelofTLl02proteinandthe仃anslocationofPKC—a丘omcytoplasmtocyt