通过激活和抑制epcs的cma探讨cma和大自噬相互关系的实验研究

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：．塞丝乏日期：趁竺：生尘苏州大学学位论文使用授权声明㈣本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相

2、一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文日本学位论文属在竺!：年』月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：叁．丝日导师签名：垄垫竺参一日期：坦丝：!￡尘期：丝!兰：!丘!!通过激活和抑制EPcs的cMA探讨cMA和大自噬相互关系的实验研究中文摘要通过激活和抑制

3、EPCs的CMA探讨CMA和大自噬相互关系的实验研究中文摘要目的：分别应用SB203580(吡啶异咪哒唑化合物)和6-AN(6-aminonicotinaIllide)作用于内皮祖细胞(endothelialprogenitorcellsEPCs)，观察大自噬标记物Lc3一II和分子伴侣介导自噬(cMA)的标记物L蝴P-2A的变化情况，探讨cMA与大自噬的关系。方法：1．密度梯度离心法分离SD大鼠的骨髓单个核细胞(bonema玎ow-derivedmononuclearcells。BMMNcs)，EGM．2Mv培养基诱导、培养、扩

4、增骨髓源性EPCs并鉴定。倒置显微镜观察、M’丌法检测EPcs增殖情况。2．在EPCs中加入不同浓度的SB203580(2．5uM、5．0uM、10uM、20uM、40uM)和6-AN(2．5mM、5．0InM、10InM、20mM、40mM)，分别作用24小时。以MTT法观察药物对EPCs增殖的影响；FCM检测细胞凋亡情况；westemblot检测LC3一II和LAMP-2A蛋白的表达情况；激光共聚焦观察细胞内LAMP-2A的变化。均数以(x土s)表示，采用单因素方差分析各组均数，(P0．05)无

5、统计学意义。结果：1．FicoU法分离的大鼠骨髓单个核细胞，经EGM—2MV培养基培养可在体外诱导分化为EPcs。2．sB203580在浓度为2．5uM时对EPcs增殖抑制作用不明显，5．0uM及以上时抑制作用较显著(P<0．05)；6-AN浓度在2．5rnM时对EPcs增殖促进作用不明显，5．0mM及以上浓度时有明显促进作用(P<0．05)。3．sB203580在2．5uM时，细胞凋亡较少，5．0uM及以上时凋亡逐渐增多；6-AN各浓度组凋亡逐渐降低，在40mM时凋亡增高。4．sB203580各浓度组Lc3_王I蛋白呈逐渐增高趋

6、势，Lamp．2a呈逐渐降低趋势。6’AN各浓度组Lc3．Ⅱ表达逐渐降低，L锄p．2a表达逐渐升高，但在40mM时两者表达均下调。5．激光共聚焦观察细胞内hmp-2a的变化情况，6-AN组较sB203580组表现出胞浆内荧光明显的增强。中文摘要通过激活和抑制EPcs的cMA探讨cMA和大自噬相互关系的实验研究结论：SB203580抑制EPCs的CMA后，大白噬增强，一定程度上抑制细胞增殖，促进其凋亡；6-AN激活CMA，大自噬表现一定程度的下调，细胞凋亡减少。cMA和大自噬之问表现出功能互补的现象，共同维持细胞功能的稳定。关键词：

7、内皮祖细胞；大自噬；分子伴侣介导自噬；sB203580：6-ANⅡ作者：赵彬指导教师：李晓强教授通过激活和抑制EPcs的cMA探讨cMA和人白噬相互关系的实验研究英文摘要ResearchinteractionofCMAandmacroautophagythrou曲inhibitionandactivationCMAinEPCsAbstractObjectiVe：1’oa11alyzeautophagy—relatedproteinLC3andLamp-2aofmacroautophagyandCMAwhenCMAwasblocka

8、gebySB203580aIIdactiVatedby6-ANinEPCs，thenreseafchtherelationshipbetweenmacroautophagyandcMA．M．ethods：1．Ratbonem舢wwasobtaine