帕金森病相关蛋白-nurr1对酪氨酸羟化酶及p53转录活性的调控

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1、中国科学技术大学博士学位论文帕金森病相关蛋白-Nurr1对酪氨酸羟化酶及p53转录活性的调控姓名：章涛申请学位级别：博士专业：神经生物学指导教师：王光辉20090501摘要帕金森病(PD)是一种常见的神经退行性疾病，它是继阿尔海默兹病的世界上第二常见的神经退行性疾病，大约影响了60岁以上人口的百分之一。帕金森病表现为静止性振颤，僵直，运动徐缓等临床特征。PD主要的病理特征是中脑多巴胺能神经元的丧失和路易小体的形成。但是，PD的确切病因却仍然不清楚。目前已发现多种基因与PD的发生直接相关，其中一种就是Nurrl。Nurrl是孤核受体家族成员之一，

2、人们至今没有发现这类家族成员相应的配体。N肼1在多巴胺能神经元的发育和存活过程中起着十分重要的作用。Nu盯1序列的突变．291Tdel和．254T—G已在家族性PD病人中发现，并且这两种突变体降低了酪氨酸羟化酶(TH)的表达，这说明Nurrl与PD的发生直接相关。Nu仃1作为转录因子，蛋白质的翻译后修饰是它改变其转录活性的重要手段之一。最近，有文献报道了N眦1有抗凋亡功能，但具体机制不明。本论文主要探讨了Nurrl被E鼬<2磷酸化，并且磷酸化的Nurrl的转录活性有所提高，导致TH的表达量升高；Nullrl通过与p53的结合，影响p53的转录活

3、性，表现出促细胞存活的能力。主要研究结果如下：1．我们运用了体外结合实验和免疫共沉淀方法，发现Nurrl与E砌Q在体外和细胞内(二者蛋白共转染)的情况下，这两个蛋白可以结合。并且通过体外磷酸化的实验证明了Nurrl能够被活化的ERK2磷酸化。我们制备了N岍1的不同潜在E砌Q结合结构域的缺失突变体，通过进一步的体外结合实验，阐述了Nurrl序列当中与E砌Q的结合位点。而且通过将Nurrl序列当中的一共6个预测的E砌Q的磷酸化位点的缺失或者点突变，进行体外磷酸化的实验，证实了Nu玎1序列当中的S126和T132为主要的磷酸化位点，T129和T185

4、为次要的磷酸化位点。我们进一步探讨了被EI水2磷酸化的Nu玎1的转录活性是否发生变化，我们通过报告基因的实验，验证了被E砌(2磷酸化的Nurrl提高了Nurrl下游的TH的表达量，并且将N肼1序列当中的E砌Q磷酸化位点突变后，对TH的提高效应就消失了。这些结果提示，Nurrl能够被E砌Q磷酸化，并摘要且被ERK2磷酸他后的N聪l的转录活性提高了。2．我们通过过度表达N眦l在不同的真核细胞中，发现NⅢl能够降低促蠲亡基霞B觚的表达，并且通过磷A干撬翡手段蒋滇减N麟·l在这些细胞中的表达，检测到Bax的表达水平上升。由于Bax的表达量的降低会导致细

5、胞存活，敖藤采取了M狂的方法来验证了过度表达N瓣l确实能够提高细胞存活率，并且在诱导凋亡药物．阿霉素的刺激下，N㈣l仍然有着促细胞存活的功能。幽于BaX是p53麴靶基因，因两我们用体外结含实验霸免疫共沉淀的实验来验证了Nurrl与p53之闻的结合，我们又通过报告蒸因实验验证了N蝴1能够抑制p53的转录活性，导致了p53熬下游靶基因的表达降低。我们运用醋3器Nu嚣l不爵缺失突变体进行了体外结合实验，找出了Nurrl的DBD和p53结合，p53的羧基端与N粼l结合。接下来，我们进一步搽讨了N趿l是如博影确茚3的转录熬。通过报告基因实验，我们发现卜『

6、urrl对p53的转录影响是依赖于这两个蛋瞧豹摆互结合的；并且通过体孙竞争结合实验，发现N耀l与蟠3的结合影H向了p53的低聚物的彤成，最终导致了p53的转录活性的降低。遂过以上结采，我们阐述了Nu玎l被E雉02酌磷酸化修饰，提高疆熬表达，以及Nu玎1通过抑制p53的转录活性来实现的其保护功能，这一发现可能为我们更好逑了解帕金森瘸漪发癔机制，寻求治疗稿金森病静方法以及对于攻克癌症发生的难关提供一些帮助。关键词：帕金森病，磷酸化，转录，调亡，Nurrl，ERK2，TH，p53，BaXIIAbstractABSTRACTp破inSon’sdisea

7、Se(PD)，t量leseeondcommonneu鳓degenerativediseasesf0IlowingAlzheimer’sdiseaSeinmeworld，疆Iects1％peopleoVersix够yea】瞎01d．PDisap∞g∞ssiVemovement硪so遁er饿a毫fes珏ltsp瘟鞋a砖ly{bm也edea专hofdopaHline略icneuronsinthesubsta．ntiani伊aandthepresenceofsomekindofproteinagg忿ga专es趣氆edLewy80d茹鑫hllma戒ofP

8、D，i致s灌vivi鸳娃eu约璐，T如loss醴dop撇ineproductionint11ebmincausestheprimarysymptoms