酪氨酸激酶受体AXL调控p53的转录与表达介导肿瘤细胞的增殖

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1、ZSTUZhejiangSci-TechUniversity硕士学位论文MASTER’STHESIS中文论文题目：酪氨酸激酶受体AXL调控p53的转录与表达介导肿瘤细胞的增殖英文论文题目：TyrosinekinasereceptorAXLregulatestumorcellgrowthviamediatingthetranscriptionandexpressionofp53学科专业：生物学作者姓名：陆敏敏指导教师：欧文斌研究员完成日期：2018.04.18本研究由浙江省自然科学研究基金面上项目（LY18H1

2、60065）提供资助浙江理工大学硕士学位论文酪氨酸激酶受体AXL调控p53的转录与表达介导肿瘤细胞增殖摘要酪氨酸激酶受体（RTKs）在肿瘤的生长，凋亡，转移和浸润中起着非常重要的作用。受体TYRO-3，AXL和MER同属于TAM受体酪氨酸激酶家族。AXL是一种跨膜受体，广泛表达于上皮细胞和造血细胞。AXL是首次从慢性粒细胞白血病患者中分离出来的一种癌基因，后期研究发现AXL在多种肿瘤细胞中高表达。AXL配体有两种即生长抑制蛋白6（Gas6）和蛋白S，相比之下，Gas6与AXL亲和力更高。大量的研究表明Gas6

3、/AXL信号通路调控细胞增殖、存活、迁移和黏附；血凝块稳定；炎症；细胞因子释放和凋亡细胞的吞噬作用。已有研究发现突变的p53可以引起AXL表达的上调，敲除p53突变降低了AXL基因启动子组蛋白的乙酰化修饰，且发现突变的p53能够直接与AXL的启动子序列结合发挥对其转录水平的调节。本课题前期研究发现RNAi敲低AXL诱导了p53的表达，因而我们推测AXL与p53之间可能存在相互直接作用的自反馈调控环路，即p53负调控AXL的转录与表达，而反过来AXL同样负调控TP53的转录与表达。本课题利用westernblo

4、tting、免疫共沉淀、qRT-PCR、细胞组分分离、免疫荧光染色、双荧光素酶活性测定和染色质免疫沉淀-PCR、伤口愈合和细胞生长实验等方法探究了AXL敲低或过表达对p53蛋白表达的影响；AXL与p53二者之间是否存在蛋白相互作用；AXL敲低对TP53转录水平的影响；AXL和p53是否存在细胞共定位；AXL对TP53转录水平的调控机制以及AXL/p53信号通路调控肿瘤细胞的增殖与转移。结果表明：AXL负调控p53蛋白的表达；AXL和p53之间不存在直接的蛋白相互作用；AXL在转录水平负调控TP53；AXL与p

5、53存在细胞核共定位；AXL通过与TP53启动子5’端600bp左右的序列结合调控TP53的转录；AXL敲低或抑制激酶活性（R428）可以抑制肿瘤细胞（p53野生型或p53敲低后）的迁移和增殖能力。表明AXL可通过AXL/p53信号通路调控肿瘤细胞增殖，这对癌症的监控与预后具有重要意义，对于癌症治疗具有重要启示，考虑药物靶向AXL/p53信号轴可成为一种新的治疗策略。关键词：AXL；p53；调控环路；靶向治疗；增殖I浙江理工大学硕士学位论文酪氨酸激酶受体AXL调控p53的转录与表达介导肿瘤细胞增殖Abstra

6、ctTyrosinekinasereceptors(RTKs)playacrucialroleintumorgrowth,apoptosis,metastasisandinvasion.TAMtyrosinekinasereceptorfamilyincludesthreekindsofreceptors,namelyTYRO-3,MERAandAXL.AXLisatransmembranereceptorwidelyexpressedinepithelialcellsandhematopoieticcell

7、s.AXLwasinitiallyconsideredtobeanoncogeneisolatedfrompatientswithchronicmyeloidleukemia(CML),andishighlyexpressedinvarioustumorcells.Growthinhibitoryprotein6(Gas6)andproteinSareknownasAXLligands.ComparedwithproteinS,Gas6hasahigheraffinitytoAXL.Inaddition,Ga

8、s6/AXLsignalingpathwayregulatescellproliferation,survival,migration,adhesion,bloodclotstability,inflammation,cytokinereleaseandphagocytosisofapoptoticcells.Ithasbeenfoundthatp53mutantcaninduceupregulat