梅花鹿激素及其受体基因变异对产茸量的调控效应研究

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1、华中农业大学博士学位论文梅花鹿激素及其受体基因变异对产茸量的调控效应研究姓名：熊家军申请学位级别：博士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：杨利国201206摘要影响梅花鹿产茸量的因素很多，如何克服不良影响因素、以提高产茸量一直是人们追求的目标。了解鹿茸生长发育调控规律，可以促进提高鹿茸产量的新技术发展；开发操作简便、结果可靠的选种方法，培育产茸量高的新品种，是提高梅花鹿产茸量的基本手段。鉴于梅花鹿养殖中目前存在的选种方法落后的状况，本研究以湖北白鹿春实必有限公司梅花鹿养殖场(n=302)和吉林省东丰县东丰药业股份有限公司养鹿场人i养殖梅花鹿(n=234)种群为研究对象，通过分

2、析生长激素(GH)、褪黑激素I型受体a亚型(MTNRlA)基因和雄激素受体(AR)基因的单核苷酸多态性及其与产茸性状的关系，寻找SNP位点，为建立梅花鹿产茸性状分子标记辅助选择方法奠定基础；同时，应用生物信息学软件对已扩增得到的梅花鹿褪黑素受体基因进行蛋白结构与功能分析，为阐明鹿茸生长发育调控规律、开发提高产茸量的新技术奠定基础。主要研究结果如下：1．梅花鹿激素及其受体基因多态性与产茸量的关系(1)GH基因多态丝及真与．产幽关系在2个梅花鹿种群中，发现GH基因3个突变位点，并被GeneBank收录，即A176_G176突变(登录号：GQ438251．1)，A45一G45突变

3、和Iel39．T139突变(登录号：GQ438253．1)，A176．G176突变导致Stu／限制性内切酶位点的改变。利用PCR-RFLP技术进行基因分型，分析基因的多态性及其与产茸估测值翘间的关系，发现两个梅花鹿种群各基因型之间的产茸估测值差异不显著(P>0．05)；JA45一G45突变未引起限制性内切酶位点的改变，因此用AS．PCR引物，进行基因分型。而后将基因的多态性与产茸估测值之间进行关联分析，发现两个梅花鹿种群各基因型的产茸估测值都没有差异(P>o．05)；C139．T”9突变也未引起限制性内切酶位点的改变，用AS—PCR引物进行基因分型，并分析基因多态性与产茸估

4、测值之间的关系，发现在五三梅花鹿种群中各基因型之间的产茸估测值没有差异(P>o．05)，商在东丰梅花鹿种群中，CT基因型和CC基因型的产茸量估测值显著高于((P<0．05)。基因多态性及其s产茸量的关系：在2令螭藏赢酞秣邙。MTNRl,4基因外显子2出现3个突变，测定其分子结构后提交并被GeneBank收录，即cSlS_T518、G629．吐629和C635_T635突变(登录号：JN038179)。C518_T518突变引起Ecol881酶切位点的改变，利用PCR-RFLP方法进行基因分型，然后分析基因多态性及其与华中农业大学2012届博士学位论文产茸估测值之间的关系，发

5、现在两个梅花鹿种群中各基因型之间的产茸估测值都没有差异(P>0．05)：在G629_C629处突变能引起Mval酶切位点的改变。利用PCR．RFLP方法进行基因分型，并分析基因多态性与产茸估测值之间的关系，发现在五三梅花鹿种群中，CC基因型的产茸估测值显著高于GC基因型(P<0．05)，GC基因型的产茸估测值显著高于GG基因型(P0．05)。C635T635突变未引起限制性内切酶位点的改变，所以用AS．PCR引物进行基因分型，然后分析基因多态性与产茸估测值之间的关系，发现在两个梅花鹿种群的各基因型之间，产

6、茸估测值都没有差异(P>O．05)。(3)AR基囱嗲馏掀箕铲葶量钐关乔在2个梅花鹿种群中，．4R基因存在2个突变位点，测序后提交并被GeneBank收录，外显子3的C75．T75和外显子8的C256．T256(登录号：JF719040)位点。C75．T75突变引起Rsa，酶切位点改变，利用PCR．RFLP方法进行基因分型，然后分析基因多态性与产茸估测值之间的关系，发现在五三梅花鹿群体中，CT基因型的产茸量估测值高于CC基因型(P<0．05)，而CT基因型与TT基因型以及TT基因型与CC基因型之间没有差异(P>O．05)。在东丰梅花鹿群体中，CT基因型的产茸量估测值高于CC基

7、因型(P<0．05)，而CT基因型与TT基因型以及TT基因型与CC基因型之间没有差异(P>0．05)；C256_T256突变通过SSCP—PAGE技术进行基因分型，分析基因多态性及其与产茸估测值之间的关系。发现该位点仅在五三梅花鹿种群中存在多态性，但各基因型之间的产茸估测值没有达到统计学差异(P>0．05)。2．梅花鹿雄激素受体和褪黑素受体结构分析与功能预测(1)应用ClustalW多序列比对模式对MTNRlA氨基酸序列与9种其他脊椎动物比对，发现梅花鹿中该基因编码的氨基酸序列与其他动物一样保守，在MTNRIA编码