蛔虫体腔液对3t3-l1细胞增殖分化影响及其机制的研究

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1、河北农业大学硕士学位论文蛔虫体腔液对3T3--L1细胞增殖分化影响及其机制的研究姓名：褚军申请学位级别：硕士专业：基础兽医学指导教师：董世山20120531摘要本试验主要探讨蛔虫体腔液(Ascmsbodycavityfluid，ABF)对小鼠3T3．L1前脂肪细胞增殖、分化及凋亡的影响，以揭示蛔虫体腔液对机体脂类代谢的作用机理。试验方法：收集蛔虫体腔液，将起始浓度为320099／mL的蛔虫体腔液分别稀释为3000pg／mL，2000ps／mL，l00099／mL、800pg／mL、6001．tg／mL、4001ag／mL、200

2、p．g／mL、10011．g／mL、50肛g／mL、1099／mL作为试验材料。利用3T3．L1细胞建立试验模型，分别设立细胞增殖试验、凋亡试验、分化试验和PPAR7mRNA表达试验。增殖试验组：取对数生长期的3T3一L1细胞常规消化计数，准确将细胞接种于96孔培养板中，ld后将各浓度的蛔虫体腔液分别接种于细胞板继续培养，分别在24h、36h、48h时用M丌法检测细胞活性，观察不同浓度的蛔虫体腔液在不同时间段对3T3．L1细胞增殖的影响；凋亡试验组：细胞分化过程中设置蛔虫体腔液10009．g／mL组和空白对照组，36h后分别收集

3、各组细胞，用流式细胞仪检测细胞晚期凋亡率。分化试验组：将处于对数生长期的细胞进行诱导分化，设置3000／Lg／mLABF组、2000pg／mLABF组、1000／．tg／mLABF组、500p．g／mLABF组、l00“咖LABF组、50I，tg／mLABF组、IOgg／mLABF组，分化过程中分别加入对应浓度的ABF，分化结束后进行油红O染色，在510nm波长测吸光度；PPAR7mRNA表达试验组：细胞分化过程中设置1000}tg／mLABF组、100I．tg／mLABF组和对照组，分化结束后提取细胞RNA，用RT-PCR方法

4、检测PPAR7、GAPDHmRNA的相对表达。试验结果如下：1．细胞增殖结果：相同作用时间，ABF对3T3．L1细胞增殖的抑制作用与浓度成正比；当浓度一定时，ABF对3T3．L1细胞的抑制作用随时问的增加而增大。2．细胞凋亡检测结果：在3T3．L1分化过程中加入10009．g／mLABF，细胞的凋亡率由正常分化组的15．99％提高到25．87％，可显著提高细胞凋亡率。3．细胞分化染色结果：高浓度的ABF(200099／mL、100099／mL、5001上g／mL)可以极显著降低胞内脂肪的产生量(P<0．01)，胞内产脂量分别为对

5、照组的26．5％、55．5％和81．5％。低浓度(100p．g／mL、50IJtg／mL、lOI．tg／mL)的ABF与对照组相差不明显，甚至还高于对照组，但差异无统计学意义(P>O．05)。4．PPAR7mRNA表达结果：前脂肪细胞3T3一L1诱导分化过程中加入1000pg／mLABF，细胞PPAR7rnRNA表达量明显降低(P<0．01)，为对照组的57．6％，而101xg／mL的ABF对PPAR7mRNA表达量的影响与对照组相比，差异不显著(P>0．05)。结论：1．ABF干预脂质代谢可能与抑制3T3一L1细胞的增殖密切相

6、关。2．ABF干预脂质代谢可能与促进3T3．L1细胞的凋亡有关。3．ABF抑制前脂肪细胞3T3．L1转化为成熟脂肪细胞可能是干预脂质代谢的重要机制。4．ABF抑制前脂肪细胞3T3．L1转化为成熟脂肪细胞的主要机制是降低PPAR7mRNA的表达。ABF通过多种途径显著地减少了3T3．L1前脂肪细胞最终转化为成熟脂肪细胞的数量及胞内脂肪的含量。对调节脂类代谢具有显著作用。关键词：蛔虫体腔液；前脂肪细胞；增殖；凋亡；分化StudyontheeffectsandmechanismofAscarisBodyCavityFluidonpro

7、liferationanddifferentiationof3T3-L1preadipocytesMasterCandidate：ChuJunSpecialty：BasicVeterinarySciencesAdvisom：ProfessorDongShishanAbstractThisstudyexplorestheinfluenceofAscarisbodycavityfluid(ABF)ontheproliferation。differentiationandapoptosisofmouse3T3·L1preadipocy

8、tes，torevealthemechanismofactionofABFonthebedylipidmetabolism．Testmethods：CollectedAscarisbodycavityfluid,thendilutedtheinitialconc