大鼠与小鼠脑内广州管圆线虫幼虫的形态与功能研究

《大鼠与小鼠脑内广州管圆线虫幼虫的形态与功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2009级硕士学位论文大鼠与小鼠脑内广州管圆线虫幼虫形态与功能研究课题来源：国家自然科学基金项目(30972577)专业名称学位申请人指导教师答辩委员会主席答辩委员会成员病原生物学张鑫李华王殉章教授陈晓光教授郑学礼教授伦照荣教授陆家海教授论文评阅人詹希美教授陈晓光教授2012年05月22日广州硕士学位论文大鼠与小鼠脑内广州管圆线虫幼虫的形态与功能研究IIIIIIIIIIIIIIlUllI硕士研究生：张鑫Y2525270指导教师：李华教授摘要研究背景广州管圆线虫(Angiostrongylu

2、scantonesis，AC)是一种神经系统和肺寄生虫，通常生活在正常宿主(大鼠)的肺动脉中。经过大约一周的时间，成虫排的卵在肺中孵化。卵及一期幼虫在粪便中被排泄，而这些幼虫有可能以某些软体动物作为中间宿主，从而发育成三期幼虫，食用携带三期幼虫软体动物后的大鼠，幼虫将进入其血液循环到达中枢神经系统，然后经过两次脱髓鞘成为幼龄童虫，一旦到达肺动脉分支，它们生长成为成虫并开始排卵，感染后42天时可从大鼠粪便中收集到一期幼虫。而其非正常宿主比如：小鼠，豚鼠，兔子，猕猴和人类，被感染后幼虫将迁移到大脑，不能从

3、脑内钻出进入心脏和肺部发育成熟。广州管圆线虫病从东南亚传播到南太平洋、非洲、印度、菲律宾等国家和地区，报道病例己超过3000例，随着人们饮食习惯的改变以及淡水螺在我国南方地区的区域性扩散，广州管圆线虫病已成为我国部分地区最具潜在危险的食源性寄生虫病之一。广州管圆线虫感染正常宿主和非正常宿主后其发育过程不同，是否是其自身结构以及重要器官在发育过程中的不同造成了广州管圆线虫不能自行穿透非正宿主的脑部入肺发育成熟?它们在虫体发育过程中有何变化?这些问题目前还未见报道。摘要研究认为入侵中枢神经系统是广州管圆线

4、虫幼虫发育的关键阶段，其入侵宿主造成损伤的机制与多种因素有关，除虫体迁徙引起组织机械性损伤和虫体占位导致组织挤压损伤外，幼虫排泄分泌的代谢产物对自身移行也有很重要的作用。据文献报道，广州管圆线虫感染后，在移行过程中会分泌排泄水解蛋白，基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinases，MMPs)MMP-9可从脑脊液嗜酸性粒细胞中释放出来，并与嗜酸性脑膜炎相关联。在宿主的蛋白水解酶中，纤溶酶原／纤溶酶系统是由无活性的纤溶酶原组成，其可被尿激酶或组织形纤溶酶之一激活。酶系统参与基质金属蛋白酶

5、酶原活化的过程。该蛋白酶在许多中枢神经系统疾病中有致病作用。基质金属蛋白酶的明胶酶家族中，MMP一2(明胶酶A)和NdP-9(明胶酶B)，有代谢工V，V，VII，X，andXI型胶原蛋白的能力。tPA，uPA，删P一2，and删P一9的活性可以在脑脊液中被准确的测量，对这些酶的评估可能有助于对神经系统病理变化的研究。据之前的研究表明tPA，uPA可能在BALB／c小鼠嗜酸性脑膜炎中起到作用，另外MMP-9也与小鼠嗜酸性脑膜炎有关。酶是广州管圆线虫感染BALB／c和ICR小鼠脑膜炎的一个有用的标记物。I

6、CR小鼠同I(M小鼠同属一种属，同为非正常宿主，一般来说，广州管圆线虫只能在正常宿主体内生长并发育至性成熟。目前还没有确凿的证据证实宿主的免疫反应与基质金属蛋白酶系统的强度相关。分泌蛋白酶的不同是否是造成广州管圆线虫在正常宿主和非正常宿主移行结局的不同?其作用如何?发挥作用的机制具体有哪些?与虫体自身发育是否有关?这些问题尚不明确。广州管圆线虫病作为一种新发流行病，在我国多次爆发流行，并己成为重要的公共卫生问题得到重视。诊断在广州管圆线虫病的防治中起到关键作用，但由于病原学检测的敏感性低，免疫学检测成

7、为该病的重要辅助诊断方法。广州管圆线虫与其他寄生虫抗原存在交叉反应性，近年来对广州管圆线虫诊断抗原的分析取得了较大的进展；而Maleewong等纯化的雌童虫Mz29000、Chye等纯化的5期幼虫Mr204000、Eamsobhan等纯化的Mr31000和Wongkham等纯化的Mr31500抗原均提高了对广州管圆线虫检测的敏感性和特异性，但是其抗硕士学位论文原来源的获得比较复杂。对广州管圆线虫感染正常宿主和非正常宿主体，进行体外培养，收集其在不同宿主脑内的分泌蛋白酶，是否具有很好的诊断价值?能否提高

8、诊断的敏感性和特异性?尚无关于广州管圆线虫幼虫分泌代谢抗原用于诊断的报道。目的1．通过建立广州管圆线虫感染大鼠和小鼠动物模型后光镜下观察测量比较大鼠和小鼠脑内感染后第21天幼虫结构，扫描电镜下观察不同宿主脑内幼虫与发育相关的结构。2．广州管圆线虫感染大鼠和小鼠第21天幼虫进行体外培养，对幼虫及收集浓缩排泄分泌产物，进行蛋白谱分析。3．探讨小鼠脑内幼虫分泌抗原诊断价值。方法1．广州管圆线虫感染宿主模型建立观察以及幼虫相关结构观察：使用含1．59胃蛋白酶人工