富组蛋白1促进人表皮细胞、人成纤维细胞增殖和迁移在创作愈合中的作用及机制研究

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1、第三军医大学博士学位论文富组蛋白1促进人表皮细胞，人成纤维细胞增殖和迁移在创作愈合中的作用及机制研究姓名：蒋艳申请学位级别：博士专业：护理学指导教师：王仙园；罗向东201205第三军医大学博士学位论文富组蛋白1促进人表皮细胞，人成纤维细胞增殖和迁移在创伤愈合中的作用及机制研究摘要研究背景口腔黏膜创伤较皮肤创伤愈合速度快，瘢痕少，是一种理想的愈合形式，此现象归因于口腔黏膜本身的组织结构特点以及特殊的唾液环境。近来研究发现唾液中的抗菌肽成分一富组蛋白能够促进口腔黏膜上皮细胞迁移，是口腔黏膜创伤愈合的

2、主要影响因子。抗茵肽属天然免疫防御系统成员，目前研究发现其某些成员具有抵抗病原微生物以及促创伤愈合的双重功能，是一类极具应用前景的新型创伤治疗药物。由于特异性表达于人类及灵长类动物唾液，富组蛋白能否影响皮肤创伤愈合尚不清楚，研究甚少。研究目的本研究以皮肤创伤愈合相关细胞：人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株为研究对象，考察富组蛋白1(Histatinl，Hstl)对两者增殖和迁移功能的影响，并初步探讨其作用机制，旨在探明唾液特有抗菌肽Hstl对非口腔黏膜细胞的有无影响，能否促进皮肤创伤愈合，为

3、促进皮肤创面愈合提供新的治疗思路。研究方法人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株按常规方法培养，取对数生长期细胞进行下述实验。1．采用细胞计数法、MTT比色法考察不同浓度(3---100I．tg／mL)Hstl于不同时相点(24h、48h、72h)对人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株增殖功能的影响，并对其与人重组表皮生长因子(d正GF)的相互作用关系进行比较。通过流式细胞术检测不同作用时相点不同浓度Hstl对两种细胞周期的影响，初步探讨其促增殖机制。2．利用体外细胞划痕实验，考察不同时相点，

4、丝裂霉素C(MMC)处理后或未处理时Hstl和(或)rhEGF对人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株划痕创伤愈合率的影响。3．采用MTT法、体外细胞划痕实验，考察EGFR，TGFBRII，Syndencan-1及第三军医大学博士学位论文Syndencan一4四种细胞表面受体抗体对Hstl作用下人表皮HaCaT细胞株、人成纤维细胞株增殖、迁移功能的影响。4．数据采用SPSS17．0统计软件进行方差分析，组间比较采用LSD．t检验或Dunnett’ST3检验。研究结果1．3腭／mL～100gg／m

5、LHstl能够促进HaCaT细胞增殖，且与浓度、时间呈依赖关系。(1)细胞培养后24h，仅10ng／mLrhEGF组、30lxg／mLHstl+10ng／mLrhEGF组细胞数高于对照组(f=3．813，5．410，P<0．05或P<0．01)。除培养后48h30lxg／mLHstl组、3Iag／mLHstl组外，其余各实验组培养细胞后48h、72h，细胞数均显著高于对照组(f值为7．754"～24．979，P<0．01)。培养后72h，100肛g／mLHstl组细胞数(19．21+0．59)x

6、104个明显高于30肛egmLHstl组(16．19-J：0．53)x104个以及3¨g／mLHstl组(15．384-0．13)x104个(t=11．391，19．017，P<0．01)，30gg／mLHstl+10ng／mLrhEGF组细胞数(19．75+0．35)x104个高于30rtg／mLHstl组，3rtg／mLHstl组及10ng／mLrhEGF组(19．19+0．09)×104个(f值为4．579"--34．884，P<0．05或P<0．01)。各浓度Hstl单独作用组培养细胞后

7、24h～72h内，细胞数随时间延长而增加(，值为16．629一--68．891，尸<0．01)。(2)细胞培养后24h～72h内，各浓度Hstl组OD值均高于同一时相点对照组(值为3．160--一15．576，P<0．01或P<0．05)。同一时相点不同浓度Hstl组OD值随浓度降低而下降，24h～72h内100}tg／mLHstl组OD值均显著高于3I_tg／mLHstl组(艟为4．264～7．234，P<0．01)。各浓度Hstl组细胞培养后72h、48hOD值均高于培养后24h同组内OD值

8、(f值为6．219,-一22．308，P0．0