cpeb1调控人膀胱癌rt112细胞增殖和迁移的机制研究

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1、CPEB1调控人膀胱癌RT112细胞增殖和迁移的机制研究ThestudiesonmechanismsofCPEB1inregulatingproliferationandmigrationofbladdercancerRT112cells作者姓名：陈锦辉专业名称：生物化学与分子生物学指导教师：李校堃教授肖业臣副教授学位类别：理学硕士答辩日期：2015年5月30日摘要CPEB1调控人膀胱癌RT112细胞增殖和迁移的机制研究背景与目的：在世界范围内，膀胱癌在恶性肿瘤中十分常见的。在中国，其发病率位居泌尿生殖系统肿瘤之首。膀胱癌的发病

2、过程是的一个多基因参与、多因素混合、多步骤形成的，现认为主要是病毒和芳香胺类化合物导膀胱癌的发生。非侵入性低级别的膀胱癌，以染色体9p/q缺失为特征，并且在FGFR3,PIK3CAandHRAS表现为激活突变。CPEB1是胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白家族的一员，它招募翻译抑制物到其目的mRNA3’非翻译区的CPE，与其特异性序列（UUUUUAU）结合，调控mRNA的多聚腺苷酸化，从而调控mRNA的翻译。CPEB1在胃癌、乳腺癌、骨髓瘤等细胞系中是低表达的，其表达水平的下降与这些恶性细胞促进侵袭和血管生成能力有关。为了探究CPEB

3、1与膀胱癌细胞增殖、迁移的关系，本课题通过CPEB1shRNA干扰载体和Migr1-CPEB1真核表达载体转染RT112细胞，特异性的沉默与过表达CPEB1基因，观察CPEB1对RT112细胞增殖、迁移的影响。方法：1.首先建立shCPEB1干扰载体和CPEB1过表达载体，转染RT112细胞。2.采用CFU实验检测CPEB1对膀胱癌RT112细胞克隆形成能力的影响。3.CCK-8实验检测CPEB1对RT112细胞增殖能力的影响。4.AnnexinV-FITC染色流式检测CPEB1对RT112细胞凋亡的影响。5.划痕实验和Tran

4、sWell实验检测CPEB1对RT112细胞迁移的影响。5.WesternBlot检测相关蛋白的表达。结果：1.CFU结果显示CPEB1过表达实验组比对照组克隆数量少，而shCPEB1干扰组比对照形成的克隆数量增多。2.CCK-8结果显示shCPEB1干扰组比对照组增殖快，而CPEB1过表达实验组比对照组增殖慢。3.AnnexinV染色流式检测结果显示CPEB1过表达和干扰组与对照组相比细胞凋亡率均无差异。4.划痕实验显示CPEB1干扰组比对照组迁移速率慢而CPEB1过表达组比对照迁移速率快。5.TransWell结果显示CPE

5、B1干扰组与对照组相比从上室迁移到下室的速率慢，而CPEB1过表达组比对照组比从上室迁移到下室的速率快。6.WB结果显示CPEB1过表达后与对照组相比cyclinB1蛋白表达水平下调而p21、c-myc、Hif1-α蛋白表达水平上调，CPEB1沉默后cyclinB1蛋白表达水平上调而p21、c-myc、Hif1-α蛋白表达水平下调。I结论：CPEB1能抑制RT112细胞增殖和克隆形成的能力，并且能促进RT112细胞的迁移能力，可能是通过调控p21、cyclinB1、c-myc和Hif1-α等基因的表达而实现的。关键词：膀胱癌RT

6、112细胞；CPEB1；增殖；迁移IIAbstractThestudiesonmechanismsofCPEB1inregulatingproliferationandmigrationofbladdercancerRT112cellsBackgroundandObjective:Worldwide,bladdercarcinomaiscommoninthemalignanttumor.InChina,ithasthefirstofurinaryreproductivesystemtumorincidence.Bladderca

7、ncerpathogenesisprocessisaresultofpolygenicparticipation,complexfactorsandlotsofstepsofformation.Virusorsomechemicalcarcinogenssuchasaromaticaminechemicalsubstancesonthehumanbody,activateproto-oncogenebeoncogeneandmaketumorsuppressorgenesinactivationandleadtotheoccur

8、renceofcancer.Non-invasivelow-levelbladdercancerischaracterizedbylackofchromosome9p/qandactivatedmutationsinFGFR3,PIK3CAandHRASperf