ERK1-2蛋白信号在BPD新生鼠肺成纤维细胞增殖、转化及迁移中作用的研究

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1、分类号：R722.1单位代码：10159密级：公开学号：200710222博士学位论文中文题目：ERK1/2蛋白信号在BPD新生鼠肺成纤维细胞增殖、转化及迁移中作用的研究英文题目：AStudyontheRolesofERK1/2ProteinSignalinginProliferation,TransformationandMigrationofLungFibroblastsinNeonatalRatswithBPD论文作者：胡瑜指导教师：薛辛东教授学科专业：儿科学完成时间：2018年11月中国医科大学博士学位论文ERK1/2蛋白信号在BPD

2、新生鼠肺成纤维细胞增殖、转化及迁移中作用的研究AStudyontheRolesofERK1/2ProteinSignalinginProliferation,TransformationandMigrationofLungFibroblastsinNeonatalRatswithBPD论文作者胡瑜指导教师薛辛东教授申请学位医学博士培养单位中国医科大学附属盛京医院一级学科临床医学二级学科儿科学研究方向新生儿论文起止时间2007年09月—2018年11月论文完成时间2018年11月中国医科大学（辽宁）2018年11月I中国医科大学博士学位论文摘要

3、目的：随着肺泡表面活性物质的早期预防性应用，呼吸支持的大力开展，以及早产儿静脉营养等支持水平的增强，早产儿，尤其是极低和超低出生体重儿的生存率得到了大大的提高，但随之而来，由于发育不成熟的肺脏长期对氧气的依赖，导致新生儿支气管肺发育不良（bronchopulmonarydysplasia,BPD）的发生率也在逐年增加，成为威胁极低与超低出生体重儿健康的重要疾病。据报道，美国每年新增约1万的BPD患儿。目前，新生儿BPD的发病机制仍不十分清楚，尚缺乏有效的预防及治疗手段，其长期生活质量也受到严重的影响。约10~15%的BPD患儿，生后1年内可出

4、现严重的肺纤维化，甚至因呼吸衰竭而死亡。而且大部分的BPD患儿即使新生儿期顺利出院，也会因反复出现的呼吸道感染、气道的顺应性降低、肺功能障碍而多次住院治疗。至今为止，BPD的发病机制尚不完全清楚，但其最终病理结局主要表现为肺泡发育障碍及肺间质纤维化的形成。在肺组织的损伤修复过程中，纤维组织的增生替代是必不可少的病理生理途径，但肺成纤维细胞（lungfibrolast，LF）若过度增殖，沉积于肺间质，替代正常的肺上皮细胞，反而可导致肺间质纤维化。因此，在肺组织修复过程中，如何有效的调控LF的增殖，使之有效修复组织的同时，也不会过度增生而导致肺纤

5、维化，就成为防治BPD的关键。而这一问题的解决，则必须从LF增殖的调控机制着手。丝裂原活化蛋白激酶超家族（mitogenactivatedproteinkinase，MAPK）是大多数真核细胞内广泛存在的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是将细胞外信号转导到细胞内，从而引起一系列细胞反应的重要的信号传导系统。目前，哺乳动物MAPK家族中已发现有6大类至少11个成员。即p38s(α/β/γ(ERK6)/δ)，c-Jun氨基末端激酶(c-Junaminoterminalkinase，JNK)1/2/3和细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular

6、signalregulatedproteinkinase，ERK)1/2，ERK3/4，ERK5，ERK7/8。ERK是所有MAPK家族成员中最早被认识，而且是最具特征性的，是一种增殖、转化和分化MAPK。持续的ERK激活能促进细胞自G1期进入S期，与肿瘤的发生密切相关。因此我们推测“高氧—ERK1/2蛋白信号转导通路激活—LF增殖异常增加—BPD肺纤维化”可能存在一定的因果关系。本研究在我们既往研究的基础上，建立长期吸入氧气致BPD新生大鼠动物模型，并取原代培养的LF为直接研究对象，观察氧气对LF增殖及Ⅰ型胶原合成的I中国医科大学博士学位论

7、文影响，以多种方法探索ERK1/2信号转导通路在BPD肺纤维化发生发展中的动态变化，并从多角度研究ERK1/2激动剂及抑制剂对体外培养LF增殖、转化及迁移的调控。为深入探索BPD肺纤维化的发生机制提供新线索，也为阐明新生儿BPD防治的新途径奠定理论与实验基础。研究方法：1、BPD动物模型制备及原代LF培养将新生的Wistar仔鼠生后随机分为高氧组及空气组，并于实验后的3天，7天，14天，各组随机选取8只，分离左肺组织用于免疫组织化学染色观察肺组织形态。分离右肺组织进一步行Westernblot及Real-timePCR等实验方法的检测。并分离

8、纯化各组LF进行原代培养。同时取正常新生鼠肺LF，实验时细胞处于对数生长期，活细胞数超过95%，应用无血清的DMEM培养基饥饿培养24小时后，用正常含10%胎牛血清