leptinampkα2bsep调控的胆汁酸代谢在胆石形成中的作用研究

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1、目录1．Leptin／AMPKQ2／BSEP调控的胆汁酸代谢在胆石形成中的作用研1．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．2英文摘要．．．．．．．⋯．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．51．3前言．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．101．4实验材料与方法．．．．．．．．．．⋯．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．131．5结果⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯．．．．301．6讨{仑⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯．．441．7结论⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯531．8引用文

2、献．．．⋯．．．⋯⋯．⋯⋯．．．．．⋯．⋯⋯⋯541．9中英文对照⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯．．．．⋯⋯．．612．致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯623．胆汁酸与能量代谢调节(综述)⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯．63Leptin／AMPKa2／BSEP调控的胆汁酸代谢在胆石形成史．的。作用研究㈣必必摘要目的：胆石症(cholelithiasis)的病因包括胆汁代谢异常和感染。在致石性胆汁研究中，胆汁中胆汁酸含量减少是促石形成的重要因素。胆盐输出泵(BileSaltExportPump，BSEP)是调节胆汁酸排泄的关键转运体，其表达量下降将导致胆汁酸分泌减少、胆汁淤

3、积。而AMPK调节BSEP的表达，受机体代谢因素的影响。瘦素(Leptin)是机体调节能量代谢的激素之一，可通过AMPK调节机体能量代谢。本实验观察肝脏良性病变患者、胆囊固醇结石患者、原发性肝内胆管结石患者Leptin、AMPKa2、BSEP的mRNA和蛋白表达量，Leptin／AMPKa2／BSEP信号通路对胆汁酸代谢的调控，初步探讨胆石症患者中胆汁酸代谢调控机制，丰富胆石症的发病机理。对象与方法：1、研究对象共分为3组，胆囊结石(GallStone，GS)组共30例，原发性肝内胆管结石(Primaryintrahepaticstone，PIS)组共3

4、0例，肝脏良性病变(Control，CT)组，该组患者中均无合并胆道疾病，其中肝血管瘤8例，肝囊肿5例，肝外伤2例，共计15例。血清样本的获得：抽取患者术前空腹血清，采用放免法检测血清瘦素水平，运用全自动生化分析仪检测血清中总胆汁酸(TotalBileacid，TBA)、总胆红素(Totalbilirubin，TBIL)、直接胆红素(Directbilirubin，DBIL)、间接胆红素(Indirectbilimbin，IBIL)、总胆固醇(Totalcholesterol，TC)、甘油--酯(Triglycerides，TG)、丙氨酸转氨酶(Alan

5、ineaminotransferase，ALT)、谷草转氨酶(Aspertateaminotransferase，AST)。肝组织样本的获得：经伦理委员会审批授权，患方知情同意后，采集手术中切下肝组织后，立即切除适当大小装入预装RNA保存液的冻存管中，送泸州医学院附属医院中心实验室．80℃冰箱冻存。2、采用Real．timeQuantitativePCR方法，以GAPDH为内参照，检测肝组织中OB—Rb、AMPKa2、BSEP基因mRNA的表达量。OB．RB5’primer：GCCTTCATAAGCCTACCAATGTAGA，OB．Rb5’Reverse

6、r：GGAAACAAGGGACCTTCCCACTA，AMPKa25’primer：CAGGAGATGCAGTCCAGCACAA，AMPKat25’Reverser：5’GCCCACATCTACCTArCACATTCAG，BSEP5’primer：TCGCTTGTCCACCATCCAGAA，BSEP5’Reverser-GGGGATCCAGTGGTGACTAGTT。根据标准曲线和样本PCR反应Ct值，用Bio—RadiQ5软件分析计算目的基因的mRNA表达水平。3、采用Westernblot法检测肝组织中OB—Rb、AMPKct2、P．AMPKa2、BSE

7、P蛋白表达水平：以p．actin为内参，抗体1分别选择Anti-LeptinReceptorantibody：ab5593，AMPKaAntibody：2532，Phospho．AMPKa：2535，BSEPAntibody(P-18)：SC一17294，检测上述基因所编码蛋白表达量。图像结果使用Bio—Rad凝胶摄像分析系统及QuantityOne4．4．0软件分析计算相关蛋白的表达量。计量资料用均数土标准差(x-a：s)表示，用SPSS20．0软件进行统计学分析。组均数间比较采用析因设计的方差分析，组问两两比较采用最小差异t检验(LSD．t)，若方差

8、不齐，采用Durmett’ST3检验，组间三者比较采取秩和检验，P