非p53依赖通路c-myc基因调控p14arf基因表达及诱导细胞凋亡的研究

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1、青岛大学硕士学位论文非p53依赖通路c--myc基因调控p14ARF基因表达及诱导细胞凋亡的研究姓名：刘香娟申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：李福年20120518非p53依赖通路c-myc基因调控p14'博基因表达及诱导细胞凋亡的研究摘要【目的】探讨非p53依赖通路突变型(T58A)与野生型c．myc基因对p14ARF；l基l--gl表达调控及细胞凋亡的诱导功能。【方法】分别用携带突变型(T58A)与野生型c．myc基因慢病毒载体感染p53缺失型乳腺癌HCCl937细胞并得N-者过表达的稳定细胞株，

2、未感染组及感染不携带c-myc基因的慢病毒细胞做空白对照和感染对照，RT-PCR、Western免疫印迹法分别检测突变型(T58A)与野生型c—myc及p14埘基因训[矾A和蛋白表达，MTT、TUNEL检测突变型(T58A)与野生型c-myc基因过表达乳腺癌HCCl937细胞增殖与凋亡情况。【结果】RT-PCR和Western免疫印迹法均显示突变型(T58A)组与野生型组c．myc基因mRNA和蛋白过表达，野生型组p14ARFmRNA和蛋白表达量显著增多，突变型(T58A)组p14ARFmRNA和蛋白表达量

3、无明显增多，二者相比差异显著(JP<0．05)。突变型(T58A)组细胞增殖活性显著高于野生型组(P<0．05)，突变型(T58A)组与两对照组细胞凋亡率较低，三者之间相比无显著差异，野生型组细胞凋亡率显著高于突变型(T58A)组与两对照组(P

4、凋亡硕士研究生：刘香娟(普外科)指导教师：李福年教授Regulationofp14ARFexpressionandinductionofcellc—mycinp53一independentpathwayAbstract1帆Y120Ⅲ0删8㈣8吣2帅8m3帆apoptosiswith[Objective]Toinvestigatetheregulationofp14ARFexpressionandinductionofcellapoptosiswiththemutant(T58A)andwildtypec-m

5、ycinp53一independentsignaltransductionpathway．[Methods】Themutant(T58A)andwildtypec．mycgenesweretransfectedintoHCCl937bylentivirus，itformedthestableoverexpressioncelllines．Uninfectedgroupandcellsinfectinglentiviruswhichdon’tcarryc—mycgeneactedasblankcontrola

6、ndinfectioncontr01．Itdetectedc-myeandp14埘mRNAandprotein,proliferationandapoptosisinHCCl937withmutant(T58A)andwildtypec—mycbyRT-PCR，Westernblot,MTTandTUNEL，respectively．[Results]c-mycmRNAandproteinexpressioninmutant(T58A)andwildtypegroupincreaseafterlentivi

7、rusmediatedgenetransfer．ThemRNAandproteinofp14ARFincreaseinwildtypegroupwhilemutant(T58A)lossthefunction．Thegroupofmutant(T58A)andwildtypec·mycCanpromotecellgrowthproliferation．c．mycismoreeffectiveinwildtypegroupthanmutant(T58A)groupatinducingapoptosis．[Co

8、nclusion]Inp53-independentpathway,theoverexpressionofwildtypec．mycobviouslyup—regulatethep14埘expression,p14埘Callinducecellapoptosisbyregulatedrelatedgene，keepbalanceofproliferativepromotionandapoptosisinducti