FAM3B基因沉默诱导p53依赖的细胞凋亡

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1、固幽密级：——中国科学院大学UniversityofChineseAcademyofSciences博士学位论文FAM3B基因沉默诱导p53依赖的细胞凋亡培养单位：2013年01月1删坩矬Y2431032FAM3Bsilencingtriggerscellapoptosisthroughp53——dependentpathwayByHaiweiMouADissertationSubmittedtoUniversityofChineseAcademyofSciencesInpartialfulfillmentoftherequire

2、mentForthedegreeofDoctorofBiochemistryandMolecularBiologyInstituteforNutritionalSciences，ShanghaiInstitutesforBiologicalSciences，ChineseAcademyofSciencesJan，2013摘要FAM3B基因沉默诱导p53依赖的细胞凋亡牟海伟(生物化学与分子生物学)指导老师：乐颖影研究员FAM3B是2002年发现的一种蛋白质，具有炎性因子类似的二级结构。先前的研究发现FAM3B在胰腺中高表达，因此又称

3、为胰腺衍生因子(PANcreatic．DERivedfactor,PANDER)。有报道FAM3B通过与肝脏和内分泌胰腺的作用参与糖和脂的代谢。除胰腺和肝脏外，FAM3B还在其它多种组织细胞表达，提示其可能具有保守的生理功能。我们发现FAM3B在小鼠的多种组织以及人源和鼠源的诸多细胞系中表达，用RNA干扰(RNAi)的方式抑制FAM3B表达会诱发细胞凋亡；死亡受体Fas的膜结合形式增多；促凋亡蛋白Bax表达增多，抑凋亡蛋白Bcl．2表达减少；caspase．8、caspase．9和caspase．3的剪切增加；凋亡标志分子PARP

4、的剪切及入核增加。上述结果表明FAM3B的沉默同时激活外源性和内源性凋亡通路。进一步的机制研究表明，用Fas的中和抗体或者通过RNAi抑制FADD表达均不能逆转FAM3B沉默诱发的细胞凋亡，而caspase的抑制剂可以部分逆转上述过程，说明死亡受体激活介导的外源性凋亡通路不参与FAM3B沉默诱发的细胞凋亡。进一步的研究发现将FAM3B沉默能显著促进p53表达。通过RNAi敲减p53几乎可以完全逆转FAM3B沉默诱导的Bax蛋白的上调，Bcl．2蛋白的下调，caspase．8、caspase．9和caspase．3的剪切以及细胞的凋

5、亡，上述结果表明p53在FAM3B沉默诱发的细胞凋亡中起关键作用。此外，我们发现FAM3B的沉默会减少Mdm2蛋白的表达，促进p53的磷酸化。综上所述，我们的研究表明FAM3B的沉默一方面通过Mdm2蛋白的下调表达促进p53的积聚，另一方面促进p53的磷酸化，进而激活p53下游的凋亡相关通路引发细胞凋亡。本研究所发现的FAM3B表达抑制对细胞活力的影响以及FAM3B和Mdm2／p53之间的关系，为今后进一步探讨FAM3B的生理功能和病理意义提供了新的线索。关键词：胰腺衍生因子；细胞活力：凋亡；p53AbstractFAM3Bsil

6、encingtriggerscellapoptosisthroughp53-dependentpathwayHaiweiMou(BiochemistryandMolecularBiology)DirectedbyDr．YingyingLeFAM3B，alsonamedPANDER，iSacytokine-likeproteinidentifiedin2002．PreviousstudiesshowedthatFAM3Bregulatesglucoseandlipidmetabolismthroughinteractionwithl

7、iverandendocrinepancreas。FAM3Bisalsoexpressedbyothertissuesbutitsbasicfunctionisunclear．Inthisstudy,wefoundthatFAM3Bwaswidelyexpressedinmultipletissuesofmouseandvarioustypesofcellsfrombothhumanandmouse．InhibitionofFAM3BexpressionbyRNAinterferenceinducedapoptoticcellde

8、ath．KnockdownofFAM3Bincreasedtheproteinlevelsofmembrane—boundFasandBax，reducedtheexpressionofBcl．2。promotedthecleavageofcasp