sirna沉默抗凋亡基因bcl-2的表达诱导人胃癌sgc-7901细胞beclin1依赖途径的细胞自噬的探讨

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。，Ⅳ河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名

2、：袭腕峰导师签章：坳年弓月刁日目录IIIIIIIIUIIIIIIIIIIIIlY2336977中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一3研究论文SiRNA沉默抗凋亡基因Bcl．2的表达诱导人胃癌SGC．7901细胞Beclin1依赖途径的细胞自噬的探讨前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”6日U舌”“⋯””““⋯⋯”⋯⋯⋯⋯””⋯⋯”””””””””“”““⋯”⋯““”””材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17附图”⋯”·⋯⋯”””··””·“·····”“·⋯””··”··”一””·””””””·””··”·”··20附表”·⋯·⋯·⋯·”⋯”··⋯·⋯··””·””””··”⋯··“⋯·”·⋯··”⋯””··”·””26讨论⋯”·”“·””·一·”··⋯·⋯··⋯··”⋯-··”··“”··””·⋯⋯“⋯⋯⋯⋯··⋯··28结论⋯⋯·“⋯·”⋯⋯···”···”···”·”⋯·⋯⋯⋯·”⋯”⋯⋯·””“”””···““·29参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·30综述抗凋亡蛋白Bcl．2在细胞自噬中的作用及其分子机制的研究进展⋯”·

4、··”·””··⋯⋯⋯⋯·“⋯”····””·“··⋯⋯⋯··⋯·⋯”⋯⋯·”·”·”·36致谢⋯一⋯“⋯·⋯⋯“”··”·⋯”·”·”“⋯”⋯”·⋯””·”·””·”·⋯⋯⋯··“···-·”·45个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46中文摘要SiRM沉默抗凋亡基因IkI-2的表达诱导人胃癌SGC--7901细胞Beolin1依赖途径的细胞自噬的探讨摘要目的：I型程序性细胞死亡(凋亡，apoptosis)和II型程序性细胞死亡(自噬，autophagy)在调节机体环境稳态、疾病发展和清除恶性肿瘤细胞中发挥重要的生理和病理作用。自噬和凋亡在肿瘤中均可发挥促进肿

5、瘤细胞生存或死亡的双重作用，二者同为程序性细胞死亡之间存在十分复杂的联系。凋亡分子机制的研究已相当成熟，Bcl．2蛋白家族在凋亡过程中发挥至关重要的作用，然而自噬的分子机制尚不清楚。最近研究结果显示，作为自噬最重要的效应分子和肿瘤抑制因子Beclinl最初作为抗凋亡蛋白Bcl．2的交互蛋白而被分离出来，Beclinl通过其BH3(Bcl-2一homology-3(sin)amphipathicalpha-helix)结构域与抗凋亡蛋白Bcl一2上的BH3受体(BH3receptor)结合，而抗凋亡蛋白Bcl．2在细胞白噬中的作用有待进一步研究。研究表明，在亚洲和世界范围内胃癌死亡率居于人类癌症

6、死亡率的第二位，居于中国癌症死亡率的首位。而人胃癌SGC一7901细胞过表达抗凋亡蛋白Bcl一2，本研究旨在通过干扰RNA介导的基因敲除技术，降低抗凋亡蛋I兰tBcl．2的表达以揭示其在细胞自噬中的作用，为胃癌的临床治疗提供新方法，并为干扰RNA应用于临床治疗提供新的理论和实验依据。方．法：1应用基因转染、RealTimeRT-PCR(realtimereversetranscriptionpolymerasechainreaction)、Westem—Blot方法检测外源性Bcl．2特异性干扰RNA(Bcl一2siRNA)介导的抗凋亡因子Bcl一2转录后的基因沉默效应。2应用RealTime

7、RT-PCR、Westem-Blot方法检测Bcl．2siRNA转录SGC一7901细胞前后自噬效应分子Beclinl的mRNA和蛋白表达水平的变化，并分析其与抗凋亡因子Bcl．2之间的关系。3转染Bcl一2特异性siRNA后，提取基因组DNA，利用琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的降解情况，看其细胞是否发生凋亡。4用透射电子显微镜(Transmissionelectronmicroscopy，TE