长春瑞滨脂质体联合亚甲蓝逆转鼻咽癌多药耐药初步细胞毒性研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文长春瑞滨脂质体联合亚甲蓝逆转鼻咽癌多药耐药初步细胞毒性研究姓名：臧国栋申请学位级别：硕士专业：药物化学指导教师：王驰2012重庆医科大学硕士研究生学位论文长春瑞滨脂质体联合亚甲蓝逆转鼻咽癌多药耐药初步细胞毒性研究摘要目的以抗肿瘤药物VLB作为模型药物制备VLB脂质体(VLB．L)并进行处方优化研究。将亚甲蓝和VLB．L物理混合作用于鼻咽癌耐药细胞，进行初步的细胞毒性研究。方法采用pH梯度法制备VLB．L。通过紫外可见分光光度法(Ultraviolet-visiblespectrometry，UV)测定药物包封率。将VLB-L分别

2、在4"C和25℃下密闭放置30d，以包封率为指标考察VLB．L稳定性。将MB溶液和VLB．L物理混合，以鼻咽癌细胞KB及其耐药细胞KBV200为细胞模型，分别在590nm波长的激光照射和避光条件处理，进行MTT实验，考察MB和VLB．L共同作用下逆转鼻咽癌MDR效果。结果通过正交试验筛选出制备VLB．L的最佳处方：药脂比1：10，磷脂(PC)与胆固醇(Ch)的比例是4：l，外水相pH值为7．4，孵育温度为50℃，孵育时间为15min。在最佳处方条件下，包封率可以达到92．26％，用动态光散射法测定VLB．L粒径分布均匀，平均粒径为169．2nm，zet

3、a电位为．9．28mV。MTT检测结果显示：经光照射，VLB．L+MB对耐药细胞KBV200增殖抑制率最高且有浓度依赖性。结论本课题采用UV法测定VLB．L包封率，采用SephadexG．50重庆医科大学硕士研究生学位论文凝胶柱分离脂质体，方法准确，重现性良好，而且简便快捷。稳定性实验表明，在4。C贮存时，VLB．L比较稳定。VLB．L体外释药实验结果表明，药物经脂质体包载后，具有较好的缓释效果。VLB-L+MB经590nm激光照射后，对耐药细胞株KBV200增殖抑制率最高，达到85．48％，提示MB经光照射后可能有效的逆转肿瘤多药耐药。关键词鼻咽癌；

4、长春瑞滨脂质体；光动力学疗法；多药耐药COMBINATIONVINORELBINELIPOSOMESANDMETHYLENEBLUEOVERCOMESTUMORDRUGRESISTANCEOFNASOPHARYNGEALCARCINOMAINVITRoABSTRACTObjectiveSelectedvinorelbineasmodeldrug，toprepareliposomes，andformulationoptimizationstudies．methyleneblueandVLB-Lphysicalmixed，toinvestigatethec

5、ytotoxicityofthemodeldrugsonnasopharyngealcarcinomamultidrugresistantcells．MethodsPH．gradientmethodwasusedtoprepareVLB·L．Todete彻inedrugloadinginliposomesbyUV．Entrapmentefficiencywereappliedtodeterminethestabilityofliposomesat4,25"Cfor30days·MTTassaywasappliedtoinvestigatethecyto

6、toxicityofPDTandVLB-LonResistantnasopharyngealcarcinomaceUsKBV200cellsexposedat590nnlwavelengthlightexposure．ResultsTheoptimumformulawasasfollows：theratioofdrugtolipidwas1：10，phosphatide：cholesterolwas4：1，pHofPBSwas7．4，incubafiontempreturewas50℃，incubafontimewas15min·Theaveragee

7、ntrapmentefficiencyforVLBwas92．26％undertheoptimalfomlulation．Liposomeswerecharacterizedformorphologyandsizeusing4dynamiclightscattering，Theparticledistributionofsizewasuniform，theaveragediameterwas169．2nm，zetapotentialwas。9．28mV．TheMTTtestshowedthatVLB．L+MBinhibittBmorcellgrowth

8、effectandtime．dependentmanner．Theinhibitionrate