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1、成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的性质表征及用于合成β-苯丙氨酸朱龙宝,杨瑾,葛飞,陶玉贵*,宋平(安徽工程大学生物与化学工程学院，安徽芜湖，241000)摘要：克隆来源于Pantoeaagglomerans的苯丙氨酸氨基变位酶基因(pam)，构建表达载体，转入大肠杆菌中进行异源表达，采用亲和层析制备电泳纯的重组酶(PaPAM)，用于催化合成β-苯丙氨酸。结果表明：成功克隆得到基因pam，长度为1626bp，编码541个氨基酸长度的PaPAM，构建了大肠杆菌表达载体pET28a-pam，转入E.coliBL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(
2、IPTG)诱导表达，镍柱亲和层析纯化获得电泳纯的重组PaPAM。MS和NMR表征结果表明，重组PaPAM能异构化α-苯丙氨酸为β-苯丙氨酸，在最适条件下（30℃、pH9、1.5mol/LNH4+），酶活力达到2.5kU/g，在30～50℃、pH8～10下PaPAM具有较高的稳定性，金属离子Na+、Mg2+、Ca2+、Fe3+对PaPAM的活性影响较小，表面活性剂SDS和Triton100对PaPAM有较强抑制作用，在最佳反应条件下，底物的转化率达到92%。关键词：成团泛菌；苯丙氨酸氨基变位酶；β-苯丙氨酸；基因克隆；异源表达中图分类号：文
3、献标识码：文章编号：CharacterizationofPhenylalanineAminomutasefromPantoeaAgglomeransandSynthesisofβ-phenylalanineZHULong-bao,YANGJin,GEFei,TAOYu-gui*,SONGPing(SchoolofBiochemicalandChemicalEngineering,AnhuiPolytechnicUniversity,Wuhu241000,Anhui,China)Abstract:Thegeneofphenylalanine
4、aminomutase(pam)wasclonedfromPantoeaagglomeransandtheexpressionvectorwasconstructedforheterologousexpressioninE.coli.Theelectrophoreticallypurerecombinantphenylalanineaminomutase(PaPAM)obtainedbyaffinitychromatographywasusedtosynthesizeβ-phenylalanine.Theresultsshowedthat
5、thegenepamwith1626bpencoding541aminoacidsofPaPAMwassuccessfullycloned.TheexpressionvectorpET28a-pamwasconstructedandtransferredintoE.coliBL21forinducedexpressionusingisopropy-β-D-thiogalactoside(IPTG).Theproductofβ-phenylalaninewascharacterizedbyMSandNMR.Theenzymeactivity
6、reached2.5kU/gundertheoptimumconditionsof30℃,pH9.0and1.5mol/LNH4+.Theenzymeexhibitedhighstabilityat30℃～50℃andpH8～10.MetalionsNa+,Mg2+,Ca2+andFe3+hadlittleeffectontheactivityofPaPAM,whilesurfactantsSDSandTriton100hadstronginhibitoryeffectonPaPAM.Undertheoptimalreactioncond
7、ition,theconversionofα-phenylalaninereached92%.Keywords:Pantoeaagglomerans;phenylalanineaminomutase;β-phenylalanine;genecloning;heterogeneousexpressionFoundationitems:NationalNaturalScienceFoundationofChina(31671797);NaturalScienceFoundationforCollegesandUniversitiesinAnh
8、uiProvince(KJ2016A801);YouthTalentSupportProgramofAnhuiPolytechnicUniversity(2016BJRC006)成团泛菌(P.
