盐酸双苯氟嗪对缺血再灌注性脑损伤的保护作用及机制研究

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1、河北医科大学硕士学位论文盐酸双苯氟嗪对缺血/再灌注性脑损伤的保护作用及机制研究姓名：刘向楠申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：王永利201203中文摘要盐酸双苯氟嗪对缺血／再灌注性脑损伤的保护作用及机制研究摘要目前，临床上急性脑卒中的主要治疗手段是溶栓，但溶栓后的再灌注往往会加剧脑损伤，因此急需研究和开发能有效对抗缺血再灌注性脑损伤的药物。盐酸双苯氟嗪是由河北医科大学首创合成的一个新型的桂利嗪类衍生物。本实验室已通过生理、生化及形态学等多种技术从不同角度证明双苯氟嗪对缺血／再灌注性脑损伤有明显的保护作用。但是由于双苯氟嗪较难

2、溶于水，不方便临床上脑卒中病人使用。所以我们将其制成盐酸盐，增加了其在水中溶解度，使其注射液可直接血管内给药。本研究拟在整体动物水平与细胞水平建立缺血再灌注脑损伤模型，观察盐酸双苯氟嗪对缺血／再灌注损伤的保护作用，并进一步探讨其保护机制。第一部分盐酸双苯氟嗪对大鼠局灶性缺血再灌注所致脑损伤的保护作用及机制研究目的：评价盐酸双苯氟嗪在大鼠局灶性缺血再灌注所造成的脑损伤中的保护作用及其机制方法：大鼠随机分为假手术组，溶剂对照组，盐酸双苯氟嗪组2．5I．trnol／kg组，盐酸双苯氟嗪1．31xrnol／kg组，盐酸双苯氟嗪O．79m

3、ol／kg，氟桂利嗪(Flu)1．3¨mol／kg组。采用线栓法制备大鼠局灶性缺血再灌注模型，各组在缺血再灌注的同时尾静脉注射给药，给药容积为0．2ml／lOOg。假手术组只行手术通路，不插线栓不给药。缺血2h再灌4h后测定神经症状、脑含水量、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，采用HE染色法光镜下观察组织病理变化，采用免疫组织化学染色法检测AQP．4蛋白的表达，以评价盐酸双苯氟嗪对缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其可能的机制。结果：(1)神经功能评价结果显示，假手术组大鼠未产生神经功能损伤，溶剂组大鼠神经

4、功能评分为9．50士O．22，有明显损伤(P

5、显。(3)血清中SOD活性与MDA含量测定结果显示，缺血再灌注损伤后血清中SOD活性明显下降至24．86+0．86U／ml，MDA含量明显升高至6．11士0．05nm／ml，给予盐酸双苯氟嗪干预后，可减轻以上损伤，其中大剂量盐酸双苯氟嗪作用最为明显，SOD活性提高至61．79士1．09U／ml，MDA含量下降为4．644-0．05nm／ml。(4)HE染色结果显示，假手术组大鼠神经细胞未见明显病变。溶剂组大鼠缺血侧大脑皮层、纹状体和海马区出现严重的神经细胞变性坏死，胞体固缩，核浓缩深染，细胞与周围组织形成明显的间隙，出现空泡变性

6、。高中低三个剂量的盐酸双苯氟嗪可以剂量依赖性明显改善上述病变。(5)免疫组化检测AQP．4蛋白表达结果显示，AQP4主要在血管周围的胶质细胞有阳性表达，表达部位为细胞膜。假手术组胶质细胞仅有少量AQP．4的表达，缺血再灌注以后梗死周边区域AQP．4的表达则明显增多。盐酸双苯氟嗪大剂量组(4．60-2：0．31)、盐酸双苯氟嗪中剂量组(6．10-士0．37)以及Flu组(5．70-J：0．47)胶质细胞的AQP．4表达与溶剂组相比均有显著减少(P

7、P．4的表达而减轻脑水肿程度，发挥神经保护作用。关键词：盐酸双苯氟嗪；局灶性脑缺血再灌注；脂质过氧化；脑水肿；AQP-4第二部分盐酸双苯氟嗪对糖氧剥夺／复氧所致海马神经元损伤的保护作用及机制研究目的：评价盐酸双苯氟嗪在糖氧剥夺／复氧所致海马神经元损伤中的保护作用以及机制研究方法：体外培养原代海马神经元，7．8天成熟后，细胞随机分为12h—R24h组、14h—R24h组、16h-R24h组、18h．R24h组，通过MTT比色法测定细胞存活率，确定使用16h．R24h作为糖氧剥夺／复氧模型。经16h．R24h中文摘要损伤后的细胞随机

8、分为空白对照组、溶剂对照组、盐酸双苯氟嗪10山aaol／L组、盐酸双苯氟嗪lgmol／L组、盐酸双苯氟嗪O．19mol／L组和氟桂利嗪(Flu)lgmol／L组。分别测定各组神经元细胞MTTOD值、LDH漏出、胞内钙离子浓度、NO含量、NOS活性、细胞凋亡率，以