mtor抑制剂对cd4和cd8 t淋巴细胞免疫功能的影响

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1、东南大学硕士学位论文mTOR抑制剂对CD4和CD8T淋巴细胞免疫功能的影响姓名：王奕铎申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：陈明2012-05-28中义摘要mTOR抑制剂对CD4和CD8T淋巴细胞免疫功能的影响东南大学医学院研究生：王奕铎导师：陈明教授摘要目的：通过体外实验明确mTOR-I对CD4及CD8T细胞细胞因子IL一2及INF-Y分泌功能的影响。从而探讨mTOR—I对T淋巴细胞亚型(CD4及CD8T细胞)免疫功能的影响。并了解其免疫抑制功能与环孢素A相比是否有差异。方法：提取小鼠脾脏并分离淋巴细胞，通过流式细胞分选技术分离出CD4和CD8T细胞，单独培养

2、。按对照组、环孢素A组以及mTOR—I雷帕霉素(Rapa)组分组，共培养48d,时。通过实时荧光定量RT-PCR法检测各组IL-2及INF-YmRNA的表达。结果：提取的小鼠脾脏淋巴细胞经流式细胞仪分选，其中CD4T细胞占细胞总数12．1％，CD8T细胞占细胞总数5．7％。共培养48小时后行Real-timePCR示：CD4T细胞中Rapa处理组IL一2mRNA相对表达量为对照组的65．o％，CsA处理组IL一2mRNA相对表达量为对照组的62．0％；CD8细胞中Rapa处理组IL一2mRNA相对表达量为对照组的40．5％，CsA处理组IL一2mRNA相对表达量为对

3、照组的42．7％。CD4T细胞中Rapa处理组INF—YmRNA相对表达量为对照组的66．3％，CsA处理组INF-YmRNA相对表达量为对照组的52．2％；CD8细胞中Rapa处理组INF-YmRNA相对表达量为对照组的49．5％，CsA处理组INF—YmRNA相对表达量为对照组的42．4％，各组间运用独立样本t检验，PO．05)。结论：1、运用流式细胞技术分选T淋巴细胞亚型相比其他方法速度快，方便，纯度高。2、mTOR—I可以显著降低CD4和CD8T淋巴细胞IL一2和I

4、NF-YmRNA的表达。同时其抑带,]IL-2和INF-YmRNA表达的能力与环孢素A相比无明显差异。关键词：流式细胞分选；mTOR-I；IL-2：INF-Y英文摘要Ef．fectsofmTOR-IonimmunonalfunctionofCD4andCD8TcellsAbstractObjective：Invitro，understandingtheeffectsofrapamycinonthefunctionofsecretingIL·2andINF-YinCD4andCD8Tcells．Andstudyingifthereanydifferencebetwee

5、nrapamycinandclosporinAinimmuonaldepressfunction．Methods：Takethespleenfrommice，isolatemononuclearcellsandseparatetheCD4andCD8Tcellsbyflowcytometrysortingtechnique．Dividethecellsintocontrolgroupe，RapagroupandCsAgroup．AllthecellsarestimulatedwithaCD3for48hours．ThendetecttheexpressionofIL

6、-2andINF—ymRNAbysemi—quantitativeRT-PCR．Results：Aftersortedbytheflowcytometrytechnique，ithasbeencomfiredthatCD4takes12．1％andCD8takes5．7％．TheRT．PCRshowsthatRapegroupsexpresstheIL·-2andINF·-ymRNAsignificantlylowerthanthecontrolgroups(PO．0s)．Con

7、clusion：SortingTcellsbyflowcytometrytechniqueismuchfaster，moreconvenientandhigherpuritythananyothersortingmethods．rapamycincandecreasetheexpressionofIL-2andINF-ymRNAinCD4andCD8Tcells．Keywords：flowcytometrysortingtechnique；mTOR-I：IL-2；INF-Y缩略例袭缩略词表(Abbreviations)缩略词英文全称中文名称RapaRapamyc