krp203对大鼠cd4~+t淋巴细胞免疫功能影响研究

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1、%nSOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目KRP203对大鼠CIXT淋巴细胞免疫功能影响研究研究生姓名指导教师姓名余云生专业名称胸心血管外科研究方向论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：日期：2^'^hZJ苏州大学学位

2、论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年__月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：(IMh日期：赠-1^导师签名：期：士[‘VKRP

3、203对大鼠CD4+T淋巴细胞免疫功能影响研究中文摘要+KRP203对大鼠CD4T淋巴细胞免疫功能影响研究中文摘要+目的：：：探讨鞘氨醇-1-磷酸-1（S1P1）受体激动剂KRP203对大鼠CD4T淋巴细胞增殖、分化及迁移功能的影响。+方法:增殖部分：磁珠分选SD大鼠脾脏来源的CD4T淋巴细胞，抗CD3单克隆抗体刺激活化48小时后加入不同浓度的KRP203处理，根据培养基中KRP203浓度的不同，实验分为四组：Control组，10ng/ml组，100ng/ml组，1000ng/ml组。T淋巴细胞培养5天后，CCK8检测其增殖情况；分化部分：培养2天组：刺激活化方法同

4、上，向活化状态细胞每24小时加不同浓度KRP203培养，培养2天，流式细胞仪++检测不同实验组CD4CD25Treg细胞比例变化。培养5天组：同样方法细胞培养5+++天，流式细胞仪检测不同实验组CD4CD25Treg细胞比例变化。QPCR检测CD4T细胞S1P1mRNA和FoxP3mRNA表达情况，QPCR法检测Th1、Th2细胞转录因子T-betmRNA和Gata-3mRNA表达情况，QPCR法检测各组Th1、Th2细胞相关细胞因子：IL-2、IL-4、IL-5、IL-10mRNA表达情况，ELISA试剂盒检测上述细胞上清液+IL-2、IL-4、IFN-γ细胞因子浓

5、度；迁移部分：将抗CD3单克隆抗体刺激活化的CD4T淋巴细胞放置直径为3µm的上层迁移小室，下层24孔培养板孔予不同浓度的KRP203（0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）和100ng/mlSDF-1处理，置于5%CO2、+37℃培养箱内培养4h，计数统计不同实验组CD4T淋巴细胞迁移数量。结果结果：结果：：：在增殖结果中我们发现：10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml的KRP203与+CD4T细胞处理培养后，各实验处理组与Control组细胞增殖无明显差异；在培养2天组的分化结果中我们发现：10ng/ml、100ng/m

6、l、1000ng/ml的KRP203药物处++理组与空白对照组相比CD4CD25Treg细胞比例无明显变化，各药物处理组，组间无统计学差异。在培养5天组的分化结果中我们发现：1000ng/ml组与Control组相比Treg细胞比例升高，差异有统计学意义（P＜0.05），其余各组间相比无统计学差异。在各药物处理5天药物处理组中S1P1mRNA和FoxP3mRNA表达量无统计学I中文摘要KRP203对大鼠CD4+T淋巴细胞免疫功能影响研究差异。1000ng/ml组T-betmRNA表达较Control组表达减少，差异有统计学意义（P＜0.05），其他药物处理组与Cont

7、rol组对比无明显差异，各组间比较无统计学差异。Th1细胞相关细胞因子IL-2mRNA100ng/ml组和1000ng/ml组表达较Control组减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。100ng/ml组和1000ng/ml组Gata-3mRNA表达较Control组表达增多，差异有统计学意义（P＜0.05）。Th2细胞相关细胞因子IL-4和IL-5mRNA表达在100ng/ml组和1000ng/ml组较Control组增多差异有统计学意义（P＜0.05），100ng/ml组和1000ng/ml组组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。IL-1