brg1基因在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及分子机制研究

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1、徐州医学院硕士学位论文BRG1基因在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及分子机制研究姓名：张翠朋申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：郑骏年2012-03徐州医学院硕士学位论文BRGl基因在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及分子机制研究中文摘要目的体外研究BRGl基因对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法siRNA技术降低乳腺癌细胞MDA．MB．231和BT-549中BRGl蛋白表达水平，并用West锄Blot验证干涉效果；用CCK-8细胞增殖实验分析BRGl基因对两种乳腺癌细胞增殖能力的

2、影响；利用流式细胞分析技术研究BIⅪl基因在两种乳腺癌细胞周期进展中的作用，并利用W-estemBlot研究BRGl对多种细胞周期蛋白(CDK)及细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKIs)的影响；利用Trallswell细胞迁移及侵袭实验分析BRGl基因对两种细胞株迁移及侵袭能力的影响；并利用明胶酶谱实验分析两种乳腺癌细胞分泌至胞外的基质金属蛋白酶(MMPs)的变化情况，利用west锄Blot检测MMPs及基质金属蛋白酶组织抑制因子(TMPs)蛋白表达水平的变化情况。结果siI斟A技术能明显降低MDA．MB一231和

3、BT-549两种乳腺癌细胞BRGl基因的表达；CCK．8细胞增殖实验结果显示，BRGl基因干涉后明显抑制两种乳腺癌细胞的增殖能力；流式细胞分析技术及westemBlot实验结果显示BRGl通过调节CyclinE、CyclinE2、CyclinB1和p27的蛋白表达参与细胞周期调控；TraIlSwell细胞迁移及侵袭实验结果显示，BRGl表达降低后明显抑制两种乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力；westemB10t及明胶酶谱实验显示BRGl通过上调MMP．9和MMP．2的活性水平和下调TIMPl和TIMP2表达水平来促进

4、乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结论BRGl基因表达降低通过下调CyclinE、CyclinE2、CyclinB1蛋白的表达，同时上调p27蛋白的表达，而使MDA．MB．231和BT．549两种乳腺癌细胞徐州医学院硕士学位论文均停滞在Gl期，最终抑制两种乳腺癌细胞的增殖能力。BRGl基因表达降低通上调TMP2和Tm01的表达抑制相应的基质金属蛋白酶MMP．2和MMP．9的表达，下调MMP．2和MMP．9的酶活性水平，发挥抑制两种乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力的作用。关键词BRGl；乳腺癌；增殖；迁移；侵袭4徐州医学院硕

5、士学位论文一———————————————————————————————————————————————————一ThemolecularmechanismofB1]}-G1generegulateshumanbreastcancerceUprolifleration，migraⅡonandinVasionAbstractobjec伽eTheaimofthisstIldyistoinVcstigatemeroleofBRGlgeneinⅡlehllmallbreastcaIlcercdlprolif．erat

6、ion，mi孕．ationandiIlVasioninVi缸．o．MethodsWeutilizedsmallnerf撕ngI斟A(siIⅢA)t9chnologyto墨ileIlceBRG1expressioninMDA-MB．231andBT．549breaStcancercellsandidentifiedtllel(Ilockdowne虢ctbyWbstenlB10t．CCK-8cellproli蠡瀚tionassaywasusedtodetectt11einnuenceon廿1epr01if砒iono

7、f廿lesetwocellsaRerBRGlknockdown．F10wtypeCellanalysistechnology(FACS)andWbst锨B10twllichwasdoneby戚ngamultitlldeofcyclin趾dcyclin—d印c11dentl(inasei1111ibitorantibodysamplerl(itswereusedtostIJdymem01ecularmechaIlismsofBRGlinthecellcyCleprogrcss．TrallswellceUmi孕at

8、ionassayandmatrigdcdlinVasionaSsaywereperfomedt0studywhemerBRG1isinVolVedinbreastcancercellmigration锄dinVasionabilities．TIo6盯廿lercon6nnmeresult，wealsodetectedMMPsactiVitiesa11dMMPsa11dTIMPsprote