布拉氏酵母菌表面展示系统的构建与应用-研究

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1、布拉氏酵母菌表面展示系统的构建及应用研究表明，pSDSb和pSDSc两种表面展示质粒对外源蛋白的展示效率差异不显著(P=O．974)。(二)稳定表达表面展示系统：1．稳定表达表面展示质粒的构建：破坏瞬时表达表面展示质粒上的2-micronorigin元件，构建稳定表达表面展示质粒pLSDSb和pLSDSb2。2．利用EGFP蛋白作为报告蛋白，鉴定稳定表达表面展示系统的可用性：将EGFP基因克隆到pLSDSb、pLSDSb2质粒上的AGA2基因表达盒内，构建EGFP表面展示质粒。荧光分析和Westernblot结果表明，EGFP蛋白能够展示在布拉氏酵母菌细胞表面。

2、(三)布拉氏酵母菌表面展示系统的应用研究1．瞬时表达与稳定表达表面展示系统对EGFP蛋白展示效率的比较：利用荧光、流式分析比较两种表面展示系统对EGFP的展示效率，荧光结果表明：在培养24h时，瞬时表达表面展示系统可将EGFP展示在酵母细胞表面，培养120h后，荧光逐渐消失；与瞬时表达表面展示系统不同，在培养36h时，稳定表达表面展示系统可将EGFP展示在酵母细胞表面，只要培养酵母细胞，外源蛋白可一直表达。流式结果表明：pSDSb—GFP的展示效率为87．89％，pLSDSb．GFP的展示效率为92．34％，pLSDSb2．GFP的展示效率为92．45％，说明稳

3、定表达表面展示系统的展示效率稍高于瞬时表达表面展示系统。2．将鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白。2(EtMic2)基因克隆到pSDSb、pSDSb2质粒上，构建EtMic2瞬时表达表面展示质粒；通过间接免疫荧光分析可知，在培养12h时，EtMic2即可展示在酵母细胞表面。关键词：布拉氏酵母菌；酵母表面展示；a一凝集素；EGFP；鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白一2n山东农业大学硕士学位论文TheEstabfishmentandAppficationofSaccharomycesboulardiiSurfaceDisplaySystemAbstractSaccharomycesb

4、oulardii@boulardii)isanon-pathogenicprobioticyeastisolatedfromIndonesialycheeandotherfruithasantibacterial，resistthepoisonofdiarrhoea,maintainthehostgastrointestinaltractmicro—ecologicalbalance，andimprovethebodynonspecificimmunity．MostresearchesofS．boulardiihavebeenfocmedontheclinica

5、lapplication，themechanismofSboulardii，particularlythemechanismandgeneticmanipulationsofS．boulardiihasfewstudiesandreports．SincethefirstdevelopmentofacellsurfacedisplaysystemonabacteriophagebySmith,therehasbeensubstantialprogressincellsurfacedisplaytechnologies．Yeastisaeukaryoticorgan

6、ismthatissimilartohighereukaryotesinpost-translationalprocessing，yeastsurfacedisplaysystemhasbecomeanidealsurfacedisplaysystemforeukaryoticpathogens．Usingtheprobioticsurfacedisplaysystemasalivevaccinevectorisoneoftheimportantapplicationsinmedicineandveterinarysciencefield，Saccharomyc

7、escerevisiae假cerevisiae)andLactobacillushasbeenusedasaplatformforlivevaccine．Asoneofthemostvaluableprobiotics，theSboulardiihasneverbeenreportedpreviouslyasthehostofasurfacedisplaysystem．Inthisstudy,ana-agglutininWasusedtoconstructthe＆boulardiisurfacedisplaysystems(thetransientexpress

8、ionandstable