犬弓形虫抗体金标试纸条的研制

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1、万方数据ROC曲线分析显示，GRAl．ELISA、GRA71．ELISA、TLA-ELISA曲线下面积(AUC)依次为0．957(95％CI，0．919．0．995)；0．973(95％CI，O．955．0．991)；0．948(95％CI，0．911-0．986)，由于GRA7．ELISA的AUC最接近于I，所以GRA7．ELISA表现出较好的稳定性。研究结果表明GRA7蛋白具有较好的抗原性，可用于进一步建立免疫胶体金快速检测试纸条的研究。2成功制备兔抗GRA7多抗，以GRA7为抗原ELISA检测滴度高于12800，以nA

2、为抗原ELISA检测滴度为3200。通过WesternBlot验证制备纯化后的GRA7抗体，表明其与GRA7、TLA在目标蛋白大小处均有反应性。最终确定最佳蛋白包被pH值为8．0，最佳蛋白标记量为15．6I．tg／mL，金标抗原最佳铺金稀释度为1：10(50止原液加450灶重悬液)：T检测线GRA7蛋白划线浓度为0．5mg／mL，C检测线兔抗GRA7多抗划线浓度为0．5mg／mL；稳定性试验验证试纸条室温保存至少一个月有效，4。C保存至少半年有效。用GRA7为抗原的胶体金试纸条(GRA7．IC)对259份犬血清检测，样品阳性

3、率为15．8％，低于GRA7．ELISA样品阳性率(17．0％)。(承A7．IC与IFA、MAT联合确定的阴阳性血清比较，阴阳性不同部分用McNemarchi．square统计分析无显著性差异(p>0．05)；结果相同部分比较显示Kappa=0．7889，(95％CI：0．6864．0．8914)，说明两种方法具有较高一致性，结果一致正确率为94．2％。检测结果显示该法敏感性为79．5％，特异性为97．2％。研究结论：1．建立了重组抗原GRAl、GRA7及TLA的弓形虫抗体间接ELISA方法，重组GRA7-ELISA敏感性、

4、特异性高于GRAl．及TLA．ELISA；2．成功制备兔抗GRA7抗体，ELISA及WesternBlot验证该抗体与GRA7蛋白及虫体裂解蛋白TLA均有良好的反应性：3．制备了犬弓形虫抗体金标试纸条，敏感性为79．5％，特异性为97．2％，可作为犬弓形虫病快速诊断方法。关键词：弓形虫，ELISA，胶体金，GRA7III万方数据DevelopmentOfAcolloidalgoldstripForRapidDetectionOfAntibodyToToxoplasmaGondiiInCanineAbstraetToxopla

5、smosisisaworldwidepopularparasiticzoonosescausedbyToxoplasmagondii，almostcaninfectallwarm-bloodedanimalsandsomecold-bloodedanimals，withaverywidehostrange．Ontheonehand，itcancausepregnantwomenabortion，fetalabnormalities，andcongenitaldefectorstillbirth，causingseriousc

6、onsequences；ontheotherhand，itCallalsoleadimmunocompromisedpopulationssuchasAIDSpatients，cancerpatientstomyocarditis，pneumoniaorfatalencephalitiseta1．PeoplegetinfectedbyToxoplasmagondiimainlythroughintakeundercookedmeatcontainingparasitecystorthefruits，vegetablesand

7、waterpollutedbyZgondiioocyst．Therefore，monitoringandpreventionofTgondiiinfectioninanimalscalleffectivelycontrolthespreadoftheparasite．Dogsplayanimportantroleinspreadingtheparasitetohuman，theycancarryoocySttohumanlivingarea,moerover,ifpeopleeatdogcontainingwithTgond

8、iicystmaygetinfected．Atpresent,modifiedagglutinationtest(MAT)，indirecthaemagglutinationassays(IHA)，indirectfluorescentantibodytest(IFA)，enzyme—li