幽门螺杆菌igg抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制

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1、幽门螺杆菌IgG抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制【摘要】目的建立一种快速检测抗H.pyloriIgG抗体的胶体金免疫层析试纸条，并优化制备中各关键步骤的实验条件。方法以柠檬酸三钠还原法制备20nm的胶体金溶液，葡萄球菌A蛋白（SPA），制备免疫胶体金复合物，组装胶体金免疫层析快速诊断试纸条。结果用柠檬酸还原法制备的20nm胶体金溶液呈亮红色。胶体金标记SPA的最低稳定浓度5μg/ml，最适稳定量为6μg/ml。SPA标记的最适pH为6.0。以此试纸条检测临床血清标本与进口ELISA试剂盒比

2、较，组间阳性率比较差异无显著性。结论胶体金免疫层析试纸条质量稳定性不但与抗原抗体的选择、用量优化、层析材料的选择、胶体金的制备与标记等因素密切相关，而且缓冲系统的优化、辅助添加剂的选择与优化组合也非常重要。【关键词】幽门螺杆菌；胶体金；免疫层析检测　　ResearchondevelopmentofgoldimmunochromatographictestkitforserumH.pyloriantibodyIgG　　【Abstract】ObjectiveDevelopinggoldimmunoc

3、hromatographictestkitforserumH.pyloriantibodyIgGandoptimizethekeyexperimentconditions.MethodsPreparingthecolloidgoldparticlesof20nmmunochromatographytestkitforserumH.pyloriantibodyIgG.ResultsThespheroidalcolloidgoldparticlesof20nmisshoinimalstablecon

4、centration(MSC)ofgold-SPAis5μg/ml，andthesuitablestableconcentration(SSC)is6μg/ml.ThepH6.0isappropriate.53serasamplesethods.ConclusionThequalityofgoldimmunochromatographytestkitisassociatedmunochromatographicassay在幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）感染的诊断中，细菌

5、培养、组织病理学检查、尿素酶试验、呼气试验等方法或因为给患者造成的侵入性痛苦，或需要一定的条件和技术，或因为需要特殊仪器，或因为费用昂贵等，其临床推广及多次重复追踪复查受到限制。而血清学检测因其非侵入性、快速、准确，可同时处理大量标本，检测不同类型的抗体，在临床检验、基础研究中倍受青睐。20世纪80年代兴起的胶体金免疫层析检测（goldimmunochromagraphyassay，GICA），操作简单快捷、结果清晰易于判断、无需复杂的实验技能和特殊设备，特别适于基层卫生单位使用。本研究预采用H

6、.pylori超声全菌体抗原、葡萄球菌A蛋白（SPA）抗原，尝试研制一种根据双抗原夹心法检测原理检测血清、唾液中抗H.pylori的IgG抗体的胶体金免疫层析检测试剂，优化胶体金免疫层析快速诊断试纸条研制各关键步骤的实验条件，为进一步研制和开发奠定实验基础。　　1材料与方法　　1.1材料　　幽门螺杆菌菌种SS1为军事医学科学院微生物与流行病研究所保存；TSB肉汤（Trypticsoybroth）为DIFCO公司产品；氯金酸（HAuCl4.H2O），上海化学试剂公司产品；柠檬酸三钠（Na3C6H5

7、O7.2H2O），北京北化精细化学品有限公司产品；葡萄球菌A蛋白（SPA）、牛血清白蛋白（BSA），均为Sigma公司产品；聚乙二醇（PEG20000），FLUKA公司产品;以上试剂均为分析纯。厌氧培养罐AnaeroPackRectangularJar为三菱化学公司产品。　　1.2方法　　1.2.1玻璃器皿的清洁　　制备胶体金的所用容器均应反复清洗，并硅化处理玻璃容器的内表面，最后用MQ超纯水冲洗晾干备用。　　1.2.2胶体金颗粒的制备　　取1%氯金酸溶液1ml，加99ml超纯水成终浓度0.01

8、%的氯金酸溶液，加热沸腾后，取1%柠檬酸三钠1.6ml一次性迅速加入煮沸的氯金酸溶液中，继续加热至溶液由淡黄色转为蓝黑色最终变为亮红色，颜色稳定后继续加热5min，室温冷却，补充失水至原体积。　　1.2.3免疫胶体金复合物的制备　　1.2.3.1胶体金标记蛋白最低稳定浓度与最适稳定量的确定　　目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量比例：用0.1mol/L的碳酸钾溶液调节胶体金溶液的pH至5.9～6.2，取11支洁净试管分装胶体金溶液（1ml/管）。将待标记蛋白质SPA逐级稀释后（由2～10μg另设对