花生子叶再生体系及转化体系的建立与优化

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1、河南农业大学硕士学位论文花生子叶再生体系及转化体系的建立与优化姓名：王允申请学位级别：硕士专业：作物遗传育种指导教师：殷冬梅201205河南农业大学2012届硕士学位论文摘要花生(ArachishypogaeaL．)是重要的经济作物和油料作物，但花生容易受到病虫害等不利冈素的危害，从而影响花生的产量和品质。本论文选用花生品种农大花410，农大花416和远杂9102，建立花生子叶再生体系，诱导芽丛成酶、从筛选适宜l(1Il浓度和探索适宜侵染的菌液浓度及侵染时间和共培养时问4个方面进行提高农杆菌介导花生遗传转化效率。通过以上研究，优化了农杆菌介导花生遗传转化的技术

2、体系，将外源基因转入花生品种远杂9102中，获得抗Km的植株。通过PCR检测证明外源基因已整合到花生基因组中。试验结果如下：1．适宜诱导芽丛成苗的培养基激素配比：设置芽诱导培养基中不同激素浓度的配比，共15个处理。以子叶为外植体在诱导培养基上诱导丛生芽的形成，2周左右观察丛生芽的诱导率。结果表明，(1)基因型对再生率有很大影响，不同花生品种不定芽的形成有明显的差异。(2)远杂9102子叶外植体在培养基MS+lmg／L2，4-D+O．3mg／LTDZ诱导芽丛效果最好，丛生芽诱导率为70％。在上述试验的基础上，进一步比较3种芽伸长培养基，将带有不定芽的愈伤组织转至

3、添加6一BA(0，2，4mg／L)的培养基上，促进不定芽伸长形成植株，转移2—4周后，观察丛生芽成苗的效果，结果表明，在MS培养基上伸长培养芽丛成苗效果虽好，花410，416和远杂9102不定芽形成植株率分别为84％，80％，76％，将再生小植株从基部切下转至生根培养基上，使其生根长成完整植株。在MS+lmg／LNAA培养基上生根效果较好。2．确定了Km的浓度，芽诱导培养基中添加km的最适浓度为150mg／L可有效的抑制子nf．不定芽的形成。添加300mg／LCb可有效抑制农杆菌LBA4404的生长，且对花生外植体的再生无显著影响。3，对农杆菌介导遗传转化的适

4、宜条件进行研究，结果表明：(1)菌液浓度对转化率影响较人，以0‰。产0．5为最好。(2)适宜侵染时间为15min，转化率较高。(3)农杆菌共培养时间3d，转化率较高。4．将GUS基冈转入9102花生品种中。利用优化的遗传转化体系，以预培养2d的花生品种9102的子叶为外植体，经农杆菌I．BA4404侵染，Km筛选和标记基因PCR检测，得到目的基冈转化植株。5．通过对组培和转化条什的优化研究，提出农杆菌LBA4404介导花生基冈转化的技术流程：选tLIj花生晶种远杂9102的成熟饱满的种子。经表面消毒后，取预培养2d的子叶，Hj活化的农杆菌菌液(OD600=O．

5、5)浸染15min，黑暗条件卜．共培养3d，转接在诱导培养基MS+lmg／L2，4-D+O．3mg／LTDz+150mg／LKm斗300m影7Lcef中抑菌培养并获得芽丛，2周后将丛生芽转接剑MS+150mg／LKm+300mg／Lcef的培养基上促进芽的仲}：=，每2w继代一次。当芽伸艮剑3—4cm，转到MSB5+1mg／LNAA+150mg／LKm+30()mg／Lcef培养基中诱导生根。关键词：花生(A．HypogaeaL．)；组织培养；再生体系；农杆菌；遗传转化河南农业大学2012届硕士学位论文AbstractPeanut(Arachishypogae

6、aL．)isanimportanteconomicandoilcrop．Disease，insectandpestgrassareeasilyaffectingtheproductivityandqualityofpeanuts．PeanutvarietiesYuanza9102、Hua410andHua416wereusedforthestudyonestablishmentofpeanutcotyledonsystem，inducedbudclumpofage，fromscreeningsuitableconcentrationofKmandexplore

7、suitableinfectionofbacterialconcentrationandinfectiontimeandtotalculturetime4aspectsimprovetheAgrobacteriummediatedgenetictransformztionefficiencyinpeanut．Thisstudyisfirsttoestablishasystemofefficientplantregenerationintissuecultureofpeanut．Baseontheregenerationsystem，Agrobacteriumt

8、umefaciensmediatedt