胶质瘤干细胞的体外磁性标记和mr示踪研究

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1、目录中英文缩写词对照...................................4摘要....................................................5前言...................................................10材料与方法...............................................12结果.................................................

2、....18讨论.....................................................33小结.....................................................39参考文献.................................................39附录...................................................44个人简历...........................

3、................44致谢.....................................................45综述.....................................................463中英文缩写词对照缩写英文全称中文全称GSCsgliomastemcells胶质瘤干细胞PBSphosphoricbuffersolution磷酸缓冲液TAtransfectionagent转染剂PLLpoly-L-lysine多聚赖氨酸ultrasmall

4、superpararmagneticUSPIO超小超顺磁性氧化铁iornoxideMRImagneticresonanceimaging磁共振成像T2transverserelaxationtime横向弛豫时间R2relaxationrate弛豫率T2WIT2-weightedimagingT2加权成像TRrepeattime重复时间TEechotime回波时间FOVfieldofview视野FAFlipangle翻转角3-(4,5)-dimethylthiazal-2yl)-2,5-溴化-3(4,5)-二甲基噻唑M

5、TTdiphenytetrazoliumromid-2)-2,5-二苯基四氮唑4胶质瘤干细胞的体外磁性标记和MR示踪研究摘要研究背景与目的：神经胶质细胞瘤是颅内最常见的实体肿瘤，占全部原发性脑肿瘤的60%以上，其中以Ⅳ级胶质瘤恶性程度最高，具有难治疗、易复发、死亡率高等特点。虽然临床上采用外科手术、术后放疗、化疗等综合治疗，胶质瘤的预后依然较差。随着2002年Ignatova等报到了皮层的胶质瘤存在神经干细胞样细胞，胶质瘤干细胞（GSCs）引起了国内外专家的注意，胶质瘤干细胞也得到越来越多的认同。胶质瘤干细胞具有自我

6、更新、增殖和多向分化等干细胞特性，是胶质瘤的起源细胞，也是术后复发的关键，它的发现为临床胶质瘤的治疗提供了新的策略。本实验研究采用无血清培养法从大鼠C6胶质瘤中提取、分离胶质瘤干细胞，并对其进行鉴定；然后在体外以多聚赖氨酸（PLL）为转染剂、利用超小超顺磁性氧化铁颗粒（USPIO）标记胶质瘤干细胞，观察、检测磁性标记对胶质瘤干细胞生物学特性的影响；对磁性标记干细胞进行磁共振扫描，寻找体外成像磁性标记细胞的最佳序列，为观察原位种植胶质瘤干细胞的迁移、分化等生物学特性研究提供依据。材料和方法：C6胶质瘤细胞原位种植于25

7、0-300g左右的SD雄性大鼠大脑半球内，一定时间后（15天左右）取出肿瘤，消化、分离，用含生长因子的无血清培养液重悬细胞，并连续传代。以PLL-USPIO为细胞内对比剂对GSCs进行磁性标记，计算不同天数（1、3、5天）细胞标记阳性率、细胞活力；四氮噻唑蓝(MTT)比色试验法评价磁性标记对GSCs增殖能力的影响；将胶质瘤干细胞重新原位种植于大鼠5脑组织中观察磁性标记对胶质瘤干细胞成瘤能力的影响；然后不同细胞浓度的悬液进行MRT2map、T2*map序列扫描，计算弛豫时间及弛豫率，研究评价弛豫率和细胞浓度之间的关系，

8、并进行统计学相关分析。结果：大鼠C6胶质瘤分离、消化后采用无血清培养液培养、传代可以得到胶质瘤干细胞。利用PLL转染USPIO可以高效率标记胶质瘤干细胞，普鲁士蓝染色显示72小时干细胞标记率达92％以上；台盼蓝染色、MTT比色法及原位成瘤实验结果显示，磁性标记对胶质瘤干细胞生物学特性无明显影响。体外磁共振T2map及T2*map序列扫描结果显示