阿托伐他汀联合雷帕霉素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)

《阿托伐他汀联合雷帕霉素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、河北医科大学博士学位论文阿托伐他汀联合雷帕霉素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)姓名：李振飞申请学位级别：博士专业：神经病学指导教师：郭力201204中文摘要阿托伐他汀联合雷帕霉素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)摘要目的：多发性硬化是一种常见的中枢神经系统自身免疫性疾病，全球有超过250万患者受累。多发性硬化作为一种慢性疾病，在缓解期需要长期应用药物控制病情。目前用于多发性硬化缓解期的药物有干扰素．B，醋酸格拉默(GA)，米托葸醌等，但是这些药物不能完全控制多发性硬化的病情，并且由于这些药物需要皮下或静脉注射

2、，长期应用有诸多不便。所以方便，副作用少的口服治疗逐渐受到欢迎。包括芬戈莫多，特立氟胺在内的一些口服药物在治疗多发性硬化的临床研究方面取得了肯定的结果，但在用药安全性方面尚需进一步评估。阿托伐他汀作为临床常用的降血脂药物，其安全性已经得到肯定。而且他汀的非调脂作用越来越多的引起人们的关注，尤其是他汀在自身免疫病的治疗方面取得令人意想不到惊喜。雷帕霉素是一种口服免疫抑制剂，主要用于抑制器官移植后的免疫排斥反应。雷帕霉素的有效性及安全性己经被一个开放的临床实验所证实。在这个临床实验中，临床确诊的RRMS或继发进展性MS接受

3、雷帕霉素治疗后均明显受益，主要表现为新发的核磁增强病灶和发作次数减少，并且其毒副作用在可接受范围内。雷帕霉素在大鼠或小鼠的EAE动物模型中同样发挥作用，可以有效的抑制EAE发病初期和高峰期的病情。THl7和Treg的平衡与自身免疫性疾病密切相关。THl7是一种新的CD4+T细胞亚型，主要分泌IL．17、TNF．a等炎性细胞因子。有人发现在多发性硬化患者的脑组织和外周血中IL．17均异常高表达。Treg是另一大类CD4+T细胞亚型，在控制自身免疫病的发生发展中起着主要作用。近年来，随着Treg细胞表面标志物FOXP3+的

4、确定更是大大促进了对Treg细胞的研究。越来越多的证据倾向于Treg功能失活是多发性硬化发病的主要原因。阿托伐他汀可能通过调节THl7和Treg的平衡来控制自身免疫性疾病。有研究发现雷帕霉素并非抑制全部的T细胞亚型增殖，在体外可以选择性扩展nTreg细中文摘要胞亚群，并且可以在诱发1型糖尿病的NOD小鼠身上建立长期的免疫耐受。在哺乳动物的细胞中，雷帕霉素可以细胞内的免疫球蛋白FK506免疫蛋白，12(FKBP．12)结合形成复合物。这种复合物可以阻断一类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的激活，这一类激酶被称为哺乳动物的雷帕霉素作

5、用靶(roTOR)，其与细胞周期进程，蛋白合成以及抑制抗原诱导的T或B细胞增殖密切相关。雷帕霉素可以与细胞内的免疫球蛋白FK506免疫蛋白．12(FKBP．12)结合形成复合物，进而这种复合物可以阻断mTOR的激活。mTOR信号通路与MAPK信号通路密切相关，阻断mTOR信号通路，势必会影响MAPK信号通路，进而减弱雷帕霉素的免疫抑制效应。阿托伐他汀同样可以扩增Treg细胞亚群。阿托伐他汀的免疫抑制作用与MAPK信号通路密切相关。阿托伐他汀的中间产物通过翻译后蛋白质修饰可以调节MAPK信号通路Ras，Rac的活性。而有

6、研究表明ras．erk通路和rho．p38通路可以调节Treg细胞亚群。阿托伐他汀通过调节ras／rho通路诱导Treg细胞亚群。由此我们推论阿托伐他汀可以抑制雷帕霉素反馈性上调erk表达，增强雷帕霉素的免疫抑制效应。为阿托伐他汀联合雷帕霉素进一步临床应用治疗多发性硬化提供相关实验支持。方法：1．EAE模型建立将抗原MOG35．55用生理盐水稀释成5mg／ml，并按1：1等体积加入CFA，加入结核杆菌H37Ra使其终浓度为4mg／ml，充分混合乳化。乳化后按每只O．1ml于C57BL／6小鼠脊柱两侧分四点皮下注射，第O

7、h及第48h腹腔注射O．5mlPTX(500ng／只)。2膏申经功能评分建立EAE模型后，分别用阿托伐他汀和雷帕霉素干预EAE小鼠。采用Knoz评分法每天给小鼠评分，连续观察30天，具体评分标准如下：O分无症状；1分尾部失去张力；2分后肢力弱；3分后肢瘫痪；4分后肢及前肢瘫痪：5分濒临死亡或死亡。筛选出阿托伐他汀和雷帕霉素的最佳临床剂量及亚临床剂量。之后将亚临床剂量的阿托伐他汀和雷帕霉素联合应用干预EAE小鼠并观察神经功能2中文摘要评分。3．免疫组化法检测IL．17的表达免疫后第17．21天，每组各取5只小鼠，经水合氯

8、醛麻醉后，4％多聚甲醛灌流，取脊髓颈、胸、腰骶段石蜡包埋，5lam连续切片，进行IL．17免疫组化染色。日本OLYMPUS公司的光学显微镜观察切片，应用imagepro分析切片并计数。每只小鼠取8个不同的脊髓层面的切片，每张切片连续读取10个视野，取其平均值，进行统计学分析。4．流式细胞仪检测Treg细胞在每个流式上样管中加入10