不同时间移植骨髓间充质干细胞对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

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1、不同时间移植骨髓间充质干细胞对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用ProtectiveEffectofMSCsbyDistinctAdministrationTimeonRenalIschemia-ReperfusionInjuryinRats院系：中山医院专业：外科学（泌尿外科)姓名：邱月指导教师：戎瑞明副主任医师导师组成员：朱同玉教授许明副主任医师完成日期:2012年4月8日目录中文摘要1英文摘要3目、‘!J.g>■5_m-滅..."7材料与方法712第二部分16材料与方法

2、1621贱30^-33参考文献34魏37蘭44中文摘要不同时间移植骨髄间充质干细胞对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用目的：观察不同时间尾静脉移植骨髓间充质干细胞（MSCs)对大鼠肾缺血再灌注损伤（IRI)的保护作用。方法：(1)贴壁细胞分离法分离大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs),培养观察细胞形态，通过流式细胞仪测细胞表面标记物并诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞以证明所得纯化细胞为MSCs。（2)DAPI(4’，6-二脒基-2-苯基吲哚）和GFP(增强型绿色荧光蛋白）两种转染方法

3、标记MSCs，观察两种方法的转染效果并将标记的MSCs在不同时间移植至大鼠体内观察MSCs的趋化作用。（3)以一侧肾切除对侧肾血管夹闭方法建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型。雄性SD大鼠共80只，随机分成5组。对照组为假手术组（Sham组）、缺血组（IR组允MSCs组根据移植MSCs时间不同分为3组：术前组（再灌注前2h移植MSCs,PreOp)、术中组（再灌注后即刻移植MSCs，0p)、术后组（再灌注后6h移植MSCs,PostOp)。(4)每组取8只在移植MSCs6h后处死大鼠，观察DAPI法(n=4)和GFP法(n=4)标记的MSCs在I

4、R肾脏中的分布；(5)检测术后6h、24h、48h肾功能(n=8)；术后48h观察HE染色肾病理改变（n=8)、TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡(n=8)。结果：(1)应用贴壁细胞分离法分离的MSCs在3-6代时纯度高且活性较好，应用流式细胞仪检测细胞表面标记发现MSCs高表达CD29、CD44,低表达CD34，并在成脂肪和成骨诱导液的诱导下分化为脂肪细胞和成骨细胞。（2)DAPI法和GFP法均可用于标记MSCs,对比后发现DAPI法更适合标记MSCs,具有荧光存留时间长、无毒性、价格低廉等特点。（3)MSCs各组中，MSCs均可在IR

5、后趋化到受损的肾脏，但再灌注后移植MSCs相对于再灌注前和再灌注即刻趋化明显增多、肾脏病理减轻、细胞凋亡数减少(K0.05)o(4)MSCs组与IR组相比肾功能得到明显保护，减轻肾小管水肿，减少肾组织病理损伤和肾小管上皮细胞凋亡，差异有统计学意义（K0.05)。MSCs实验组间肾功能差异无统计学意义（乃0.05)。结论：(1)MSCs移植对大鼠肾缺血再灌注损伤能起到保护作用。(2)再灌注后移植骨髓间充质干细胞能发挥最佳的器官保护效果。关键词骨髓间充质干细胞；缺血再灌注损伤；趋化；肾脏；DAPI；GFP中图分类号R692.5Abstrac

6、tProtectiveEffectofMSCsbyDistinctAdministrationTimeonRenalIschemia-ReperfusionInjuryinRatsObjectiveToobservetheprotectionanddistributionofbonemarrowmesenchymalstemcells(MSCs)bydistinctintravenousinfusiontimeonrenalischemia-reperfusioninjury(IRI)inrats.Methods(1)Ratbonemar

7、rowmesenchymalstemcells(MSCs)wereseparatedbyadherentcellseparationandinducedtodifferentiateintofatcellsandosteoblastscells.Thecellsurfacemarkersweredetectedbyflowcytometry.(2)TwotransfectionmethodsofDAPI(4',6-diamidino-2--phenylindole)andGFP(enhancedgreenfluorescentprote

8、in)wereusedtolabelMSCsandthetransfcctioneffectsofbothmethodswereobserved.ThelabeledMSCswereadmin