tnf-α介导的nf-κb通路在肝纤维化中的作用及中药对其影响

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1、TNF．a介导的NF．kB通路在肝纤维化中的作用及中药对其影响赵芳计：学位论文：37页表格：6个插图：5幅指导教师：申请学位级别：贾玉杰教授硕士学位论文提交日期：2012年4月论文答辩日期：2012年5月学位授予单位：大连医科大学学位授予日期：2012年6月评阅人：答辩委员会主席：独创”明I删卿本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作

2、的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：盘羞签字日期：2012．年争月彤目目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13(四

3、)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2'7(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37TNF—Q介导的NF—kB通路在肝纤维化中的作用及中药对其影响硕

4、士生姓名：赵芳指导教师：贾玉杰教授专业名称：病理学与病理生理学摘要目的：肿瘤坏死因子c【(tumornecrosisfactor，TNF一0【)是调节细胞生长、分化、诱发炎症并调控细胞凋亡的细胞因子之一。核因子-kB(nucleartranscriptionfactor—kappaB，NF．kB)是一个重要的核转录因子，在肝细胞、HSCs、内皮细胞中都能检测到其表达，核因子．kB具有多向性的调节作用，可以调控多种细胞因子的转录，阻止HSCs的凋亡。本实验是研究TNF一0t介导的NF．kB在大鼠肝纤维化中的表达及中药肝复康的干预作用，并探

5、讨其作用机制。为肝纤维化的治疗提供一种新的可行性理论依据和实验基础。方法整体实验：健康SD大鼠随机分为五组：正常对照组(C)、模型组(M)、肝复康治疗组(高、中、低剂量组)。除正常对照组外，其余大鼠造模，皮下注射橄榄油稀释的10％CCl4(5ml／kg)，2次／周，共12W，复制肝纤维化模型。正常对照组以同样的方法注射等剂量的生理盐水。第12W末，处死正常对照组以及模型组大鼠。迅速取出肝组织备用。肝复康治疗组(高、中、低剂量)在造模的第9W开始以3215mg／kg．d、312．5mg／kg．d、31．25mg&g．d剂量的肝复康煎剂灌胃

6、12W。第20W末，处死其余各组大鼠，迅速取出肝组织备用。离体实验：大鼠肝星状细胞株(HSC—T6)复苏后接种于DMEM培养基中，在37"C含5％C02孵箱中培养，传代。当细胞生长处于良好状态后，在不含胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24小时后，将细胞随机分为3组：正常对照组：含10％正常大鼠血清的DMEM细胞培养基：乙醛刺激组：10％正常大鼠血清的DMEM细胞培养基中加入乙醛(终浓度2001Ltm01／L)；肝复康中剂量治疗组：含10％中剂量的药物血清DMEM细胞培养基中加入乙醛(终浓度200pmol／L)。以上3组细胞均在37℃含

7、5％的C02孵箱中培养48小时。HE染色观察肝组织形态结构变化，免疫组织化学和免疫蛋白印迹法(Western．Blot)在蛋白水平检测肝组织和肝星状细胞中各组TNF．Ⅱ的表达，逆转录．聚合酶链式反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction，RT—PCR)在基因水平检测肝组织和肝星状细胞各组TNF．O【，IkB激酶IKK．c【，NF．kB的抑制蛋白IkB—Sit，NF．kBP65的表达。结果1．肝组织形态学的变化：HE染色肝组织切片显示，与正常组相比，模型组大鼠肝组织结构破坏，肝细胞发生严重

8、的脂肪变性，坏死，凋亡，并有大量炎症细胞的浸润；肝小叶结构破坏，假小叶形成，纤维间隔增宽；而肝复康(高、中、低剂量)治疗组的肝纤维化均得到不同程度的改善。中剂量治疗组效果最为显著。2．免疫组织化学和West