tnf-α激活nf-κb信号通路对培养成纤维细胞功能的影响

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1、TNF-α激活NF-κB信号通路对培养成纤维细胞功能的影响张玉龙1，毋巨龙1，杨忠2，丁可3，李世荣1(400038重庆，第三军医大学：西南医院整形科1，基础部神经生物教研室2，西南医院骨科3)[摘要]目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子-κB(NF-κB)信号通路对成纤维细胞生物学行为的影响。方法:小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)进行体外培养，将细胞分为TNF-α组、TNF-α+吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)组及对照组，处理后的细胞采用CCK-8方法检测细胞增殖情况、流式细胞术检测细胞周期变化、Westernblo

2、t和细胞免疫荧光检测IκBα蛋白表达与定位、ELISA检测基质细胞衍生因子1α（SDF-1α）的分泌。结果:TNF-α在一定浓度范围内对成纤维细胞起到明显的促增殖作用，CCK-8检测显示TNF-α组在不同浓度和不同时相点MEF的吸光度（OD）值与TNF-α+PDTC组及对照组相比差异显著（P＜0.05）;细胞周期检测结果显示，TNF-α组S期细胞增多，G0/G1期细胞减少，阻断NF-κB信号通路（TNF-α+PDTC组）能显著减弱TNF-α作用，与对照组及相应的TNF-α+PDTC组相比有显著差异（P＜0.05）；免疫荧光染

3、色显示IκBα主要分布于胞浆，TNF-α组与对照组和TNF-α+PDTC组相比，IκBα荧光强度明显减弱。Westernblot结果发现TNF-α刺激后30min，TNF-α组和TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达均降至最低值，与对照组相比，结果差异显著（P＜0.05），随时间推移逐渐恢复，TNF-α+PDTC组IκBα蛋白表达显著高于TNF-α组，结果差异显著（P＜0.05）。ELISA检测发现TNF-α作用后成纤维细胞SDF-1α的分泌呈减少趋势，TNF-α+PDTC组则能显著逆转TNF-α作用，促进SDF-1α分泌，

4、结果有统计学意义（P＜0.05）；结论：TNF-α能通过激活NF-κB通路，影响小鼠胚胎成纤维细胞的增殖及分泌活动等细胞生物学行为。[关键词]肿瘤坏死因子-α；核因子-κB；小鼠胚胎成纤维细胞；吡咯烷二硫氨基甲酸[基金项目]重庆市自然科学基金项目(CSTC2009BB5146)[通讯作者]李世荣，电话（023）68754192，E-mail:zhengxing@vip.163.com毋巨龙，电话（023）68765350，E-mail:wj03310@tom.comTNF-αinfluencesthefunctionofcu

5、lturedfibroblaststhroughactivatingNFkappaBsignalingpathway10ZhangYulong1，WuJulong1，YangZhong2，DingKe3，LiShirong1(DepartmentofPlasticandCosmeticSurgury1，DepartmentofNeurobiology2，DepartmentofOrthopedics3，SouthwesternHospital，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing，

6、400038，China)[Abstract]ObjectiveTostudytheeffectsoftumornecrosisfactor-α(TNF-α)onthefunctionofculturedfibroblastsanditsrelevantnuclearfactor-κBmechanism.Methods:Mouseembryofibroblasts(MEF)wereculturedinvitroandweretreatedwithTNF-αorTNF-αplusPDTCrespectively.Cellpro

7、liferationandcellcyclewereanalysedbyCCK-8methodandflowcytometry.ThelevelsofIκBαincytoplasmwereexaminedwithWesternblotandimmunoflourescence.ThesecretionofSDF-1αwasmeasuredthroughELISAkits.Results:TNF-αpromotestheproliferationofMEFinaconcentration-dependentmanner,the

8、resultofCCK-8showedthattheabsorbanceinTNF-αgroupwassignificantlyhigherthanthatinTNF+PDTCgroupandcontrolgroup（P＜0.05);Cellcycleanalysisshowedthatt