microrna--212对胃癌细胞系sgc7901迁移和侵袭力影响的研究

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1、温州医学院硕士学位论文MicroRNA--212对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭力影响的研究姓名：应江辉申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：朱冠保2012-05-24温州医学院硕士学位论文microRNA212对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭力影响的研究摘要背景：胃癌是我国发病率最高的恶性肿瘤，目前治疗的首选方法仍然是以手术为主的综合性治疗，但对于进展期胃癌术后效果并不理想，而胃癌的复发和转移是造成死亡的主要原因，因此，寻找有效途径干预胃癌转移，进而提高患者的生存率具有重要意义。microRNA是近年发现的一种不编码蛋白质的内源性小RNA(21～23个核苷酸

2、)。但是它能够在转录后水平调节靶mRNA的稳定性和转录效率，通过对靶基因的调控而影响细胞增殖，分化和凋亡等过程，从而高效的调控癌基因及抑癌基因的表达，影响肿瘤的发生和发展过程。microRNA和肿瘤之间的关系已经越来越受到人们的重视。据生物信息学预测人类至少应有大约1000种miRNA，并可调节至少30％人类基因，目前已经鉴定的人类miRNA有700多种。miRNA是通过与靶基因的37UTR区互补配对，指导miRNA复合体对靶基因mRNA进行切割或者翻译抑制，从而可以调节基因功能。因此，靶向基因的干预已成为了国内外学者研究的热点。研究发现，多种肿瘤存在转移相关miRNA

3、，在胃癌研究中却鲜有报道。最近报道，通过组合的茎环RT—PCR技术对胃癌转移相关miRNA进行筛选，发现microRNA-212对与胃癌淋巴转移密切相关，且在胃癌细胞中存在差异性表达。目的：研究人miRNA一212(miR一212)对胃癌细胞系SGC7901迁移和侵袭能力的影响。意在通过miRNA生物学功能及作用靶点研究，期望找到胃癌生物治疗新的靶标，提高胃癌靶向治疗的准确性。方法：通过化学方法合成成熟型的人miR一212抑制基因i—mi—R212，分别以25、50、75、100nmol／L浓度通过脂质体转染方法转染SGC7901细胞，同时设空白和无关序列转染对照组。进

4、一步利用Real—timePCR、细胞计数*UTranswell侵袭实验方法，分别检测各组细胞miR一212的表达、miR一212对细胞增殖的影响、及对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果：各浓度i-MR一212转染SGC7901细胞后，miR一212表达均降低，以50nmol／L4温州医学院硕士学位论文i—miR一212转染组最佳，较无关序列转染组降低约18倍；i-miR-212(50nmol／L)的转染组与对照组在细胞计数实验存在明显差异(p=O．00<0．01)，提示抑制miR-212表达可促进细胞增殖。在细胞侵袭试验中i-miR-212(50nmol／L)的转染组透

5、膜细胞明显多于对照组(p=0．00<0．01)，提示抑$tJmiR212表达可提高细胞侵袭能力，在迁移试验中i-miR-212(50nmol／L)的转染组透膜细胞明显多于对照组(p=O．00>0．05)，提示抑St]miR212表达可提高细胞迁移能力结论：转染成熟型人i-miR-212能使胃癌细胞系SGC7901中miR-212的表达明显下降，并能显著促进胃癌细胞系SGC7901的增殖、迁移及侵袭能力，表明miR一212可能与胃癌肿瘤细胞的转移有关。关键词：miRNA，胃癌，转移淋巴结，miRNA一212，迁移，侵袭，增殖温州医学院硕士学位论文Effectsofmicr

6、oRNA-·212onmigrationandinvasionofgastriccancercelllinesSGC7901AbstractBackground：Gastriccancerthehighestincidenceofthemostmalignanttumorsinchina,themostpreferredtreatmentforgastriccancertreatmentisOperationorientedcomprehensivetreatment．Buttheresultoftheadvancedgastriccancerafteroperatio

7、nisnotideal，RelapseandmetastasisarethemaincausesofdeathcausedbygastriccancelTherefore，tofindaneffectivewaytointervenethemetastasisofgastriccancerissignificantly．MicroRNAdiscoveredinrecentyearsisakindofdonotcodeforproteinendogenousRNA(21～23nucleotides)．Butitcanregulatetarg