rna干扰沉默mtor基因对肝细胞癌影响体外的研究

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1、RNA干扰沉默mTOR基因对肝细胞癌影响的体外研究摘要目的：通过构建针对roTOR基因的小干扰RNA，来研究mTOR在肝癌的发生发展的作用，为肝癌的治疗确立新的靶点。方法：通过采用RT-PCR，琼脂糖凝胶电泳，westernblot等实验手段分别检测mTOR在HepG2细胞、L02细胞中的蛋白表达量及rnRNA表达量。构建mTOR-siRNA并联合雷帕霉素通过RT-PCR、westemblot、Transwell、MTT等实验手段评价mTOR-siRNA对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖、凋亡、侵袭能力以及mTOR／p70S6K信号通路的影响的研究。结果：实验结果证明mTOR、p70S

2、6K以及p-p70S6K在肝癌HepG2细胞中的蛋白质表达量及mRNA表达量均高于正常肝细胞L02，说明mTOR在肝癌细胞中呈激活状态。通过成功设计对mTOR基因的小干扰RNA，并证明对mTOR的干扰不仅能够抑制细胞的增殖和侵袭能力，还能提高细胞对雷帕霉素的敏感性。结论：通过本次研究我们可以得出mTOR基因在肝癌中的异常激活，这对我们研究肝癌诊断治疗以及肝癌发病的基础研究都设立了新的靶点。而成功设计的mTOR-siRNA不仅能抑制细胞的增殖、凋亡能力、细胞侵袭能力以及对mTOR／p70S6K信号通路产生抑制影响，还能提高细胞对雷帕霉素的敏感性。表明活化的mTOR可能是肝癌药物靶向治疗

3、中的一个重要分子靶点。关键词：mTOR；p70S6K；siRNA；癌；雷帕霉素：凋亡；肿瘤侵袭能力‘nobjective．．AbstractThemammaliantargetofrapamycin(mTOR)thatisanevolutionarilyconservedserine—threonine虹naseofa289一kDainlengthbelongstothePIKK[phosphoinositide3-kinase(P13K)-relatedkinase]family．mTORsignalingpathwayisfrequentlyactivatedinhumancan

4、cers．Inmammals，thetwobest—characterizedtargetsofmTORaretheribosomalS6kinasesandtheeukaryoticinitiationfactor(elF4E)一bindingproteinl(4E—BPl)．mTORactivationleadsthephosphorylationsofS6Kand4EBPl．Thelatterreleasesfromthecap—dependenttranslationinitiationfactorelF4E，ultimatelyresultinginenhancedtran

5、slationfromsubsetofgenesrequiredforcellgrowth．ThesetwoeventsleadtoanincreaseinribosomalbiogenesisandtheselectiveTranslationofspecialmRNApopulations．mTORhasrecentlybeenrecognizedasanimportantandattractivetherapeutictargetforcancertherapy．ThepotentialapplicationsofmTORinhibitorsfortreatingvarious

6、cancersincludingrenal，prostate，breast，pancreatic，andlungcancers，etc，havebeenactivelystudiedbothpreclinicallyandclinically．However，themTOR／p70S6KsignalingpathwayinHCChasnotbeeninvestigatedSOfar,whichimpeltheauthorstoinvestigatetheroleofmTOR／p70S6Ksignalingpathwayforfindinganoveltargetfortheantic

7、ancerdrugsinHCC．InthepresentⅡIstudy，weinvestigatedtheactivatedmTORanditsmajordownstreammembersinHCCcelllinesHepG2，aswellaSthechangesofmRNAandproteinexpressionlevels，apoptosisintheHCCcellstreatedwithrapamycinandsmallinterferenceRNA