类固醇激素合成酶在大鼠多囊卵巢综合征中表达

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1、目录一、论文缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··22分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··36结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··39参考文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·40附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··43致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··44二、综述综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··45参考文献⋯⋯⋯·:⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯··51三、独创申明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··56温州医学院硕士学位论文缩略词表温州医学院硕+学位论文.2.温州医学院硕士学位论文类固醇激素合成酶在多囊卵巢综合征中的表达中文摘要目的:多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)是临床常见的内分泌紊乱性疾病,在育龄妇女中发病率是5%一10%;PCOS本身是一种病因和临床表现十分复杂的异质性疾病,血清高雄激素血症是其典型的临床表现之一,但是发病机制还不完全清楚,因此本研究主要是:l、通过注射脱氢表雄酮(DHEA)建立类PCOS大鼠模型:2、探讨类固醇激素调节蛋

3、I三t(Steroidogenicacuteregulatoryprotein,STAR),3B-羟基类固醇(313-hydroxysteroiddehydrogenase,3p—HSD),1713-羟基类固醇(1713-hydroxysteroiddehydrogenase,1713-HSD),细胞色素P450芳香化酶(cytochromeP450Aromatase,P450arom)及其调控因子类固醇生成因子-l(Steroidogenicfactor-1,SF-1)在PCOS中的表达及与卵巢激素的关系。方法:21日龄的SD大鼠30只,随机分

4、为实验组(PCOS组,n=20)和对照组(NC组,n-lO)。PCOS组:于23日龄开始,每日16:00颈后背皮下注射DHEA0.6me,/1009体重(溶于0.2ml注射用大豆油),连续20天,并同时进行阴道涂片,以观察其动情周期的变化;NC组:每日颈后背注射O.2ml的大豆油,其余同PCOS组。于42日龄20:00禁食禁饮,次日晨称体重及阴道涂片,收集血清,放射免疫法(RIA)和ELISA检测血清激素水平。取双侧卵巢,称取重量,测量体积(体积=长X宽×高×O.5),卵巢体积和重量均是左右卵巢之和;随机取PCOS组和NC组各一侧卵巢,中性福尔马

5、林固定,常规包埋,切片,行HE染色和免疫组化,光镜观察;同时,用2.5%戊二醛固定另一侧卵巢组织,常规包埋,超薄切片,电子染色后,进行透射电镜观察。部分卵巢于.80℃保存,用Westernblot和RT-PCR待测其中蛋白或酶及mRNA的表达。结果:l、卵巢的一般情况两组大鼠发育良好,毛色润泽,行为反应无异常。与NC组相比,PCOS组的体重明显增高俨<0.05);卵巢的重量和体积未见显著变化俨>0.05)。2、血清激素水平的评估PCOS组大鼠血清睾酮水平非常显著性高于NC组俨<0.01),雌二醇水平显著高于NC组俨<0.05),孕酮水平较NC组有

6、所降低,温州医学院硕士学位论文但无显著差异。见表23、阴道涂片观察阴道涂片显示,与NC组相比,PCOS组大鼠失去了动情周期的规律性变化,主要表现为动情期和动情间期延长,大部分停留在动情期和动情问期。4、卵巢的外观和形态学变化PCOS组大鼠卵巢稍呈苍白色,可见多个囊性卵泡,双侧卵巢不对称性增大;HE染色结果显示,PCOS组多个卵泡囊性扩张,扩张的卵泡中颗粒细胞层减少,外包绕梭形的卵泡膜细胞:另可见少量黄体形成。电镜结果显示,PCOS组卵泡膜细胞内含有大量的脂滴,细胞器丰富,颗粒细胞核固缩,内质网扩张,线粒体内出现空泡。5、免疫组化检测StAR、SF

7、.1、3B.HSD、1713.HSD和P450arom的变化StAR主要表达于卵泡外围的卵泡膜细胞,以及黄体内的黄素化颗粒细胞的胞浆内。PCOS组3p.HSD特异性染色主要定位在卵泡膜细胞及黄素化的颗粒细胞中;17B—HSD在PCOS模型中主要集中在囊状卵泡的颗粒细胞层,外围的卵泡膜细胞;P450arom表达于在囊状卵泡的颗粒细胞层。SF.1主要表达于卵泡的颗粒细胞、卵泡外围的卵泡膜细胞及黄体内的黄素化颗粒细胞的胞浆内。6、StAR、SF.1、3p.HSD、1713.HSD和P450arommRNA含量的变化与NC组相比,PCOS组StAR,SF

8、一1,3B.HSD和17[I.HSDmRNA水平明显升高俨<0.05):与NC组比较,PCOS组中P450arommRNA含量则非常显著

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