姜黄素对aβ2c2535诱导的pc12细胞毒性的保护作用与其机制研究(11212)

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3、胞内神经原纤维缠结（neurofibrillarytangles，NFT），并伴有突触和神经元的缺失。β-淀粉样蛋白（β-amyloidprotein,Aβ）是构成AD特征性病理改变老年斑的核心成分。大量研究证实Aβ尤其是聚合成纤维形式的Aβ对体外培养的神经细胞及在体神经细胞有毒性作用，主要毒性片段为Aβ25-35，表现在破坏细胞膜的完整性、扰乱细胞内环境的稳定以及触发氧化应激、诱导细胞发生凋亡等方面。神经病理学研究表明，AD患者脑中神经元的凋亡率比正常人高30-50倍，细胞凋亡在AD发病中具有重要作用，是AD神经元丧失的原因之一。因此，探求可以

4、有效对抗Aβ25-35神经毒性的药物对于AD的治疗是非常必须的。姜黄素（Curcumin）是从姜黄中提取得到的主要有效成分，一直作为食品添加剂为人们所普遍利用。大量研究发现姜黄素具有抗氧化、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等生理和药理作用。近年来，姜黄素对于AD的研究越来越受到人们的关注，但具体机制尚不明确。本课题在此基础上建立Aβ25-35诱导PC12细胞损伤模型，同时应用姜黄素对其进行干预，观察其拮抗Aβ25-35的毒性的保护作用及其可能的机制。本课题分两部分。第一部分：研究Aβ25-35对PC12细胞的神经毒性作用。选用Aβ25-35诱导的PC12细

5、胞作为AD的细胞模型，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定不同浓度Aβ25-35对PC12细胞活力的影响，应用AnnexinV-PI染色通过流式细胞仪、荧光显微镜检测细胞凋亡。结果发现，显微镜下观察正常对照组PC12细胞体积较大，神经突起明显且长，细胞生长快，密度大，细胞贴壁能力强。加入Aβ25-3524h后，细胞数量减少，体积变小，突起减少变7短，细胞贴壁能力减弱，随着Aβ25-35剂量的加大，细胞明显变小变圆，突起渐消失。MTT活性测定显示随着Aβ25-35浓度的增加，细胞活性逐渐下降，在Aβ25-35为20µmol/L时细胞活力开始明显下降（P<

6、0.01），随着剂量逐渐加大，细胞活性进一步降低，呈剂量依赖，各浓度组之间均有统计学显著性差异（P<0.05）。Annexin-V/PI染色后荧光显微镜观察到Aβ25-35处理过的PC12细胞出现典型的细胞凋亡征象，早期的凋亡细胞只出现细胞膜染色而细胞核未被染色，晚期的凋亡细胞则细胞膜和细胞核同时染色。第二部分：姜黄素拮抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用及其可能的机制。选用PC12细胞，给予合适浓度的Aβ25-35和姜黄素，通过MTT，流式细胞仪，荧光显微镜、WesternBlot等方法检测细胞凋亡的变化。结果显示，在倒置显微镜下观察到20

7、µmol/LAβ25-35处理组细胞形态与正常组比较，细胞体积变小，突起减少变短，细胞贴壁能力减弱，而经过5µmol/L姜黄素处理后，细胞形态逐渐变大，突起也有恢复，细胞贴壁能力也增强。MTT结果显示姜黄素具有拮抗Aβ25-35毒性的作用，在姜黄素浓度为5µmol/L细胞活力最高（P<0.01），随着剂量逐渐加大，细胞活性开始降低，表明姜黄素在一定剂量范围具有保护作用。荧光显微镜下观察，正常组几乎没有凋亡细胞，偶见零星散在的早期凋亡细胞，即细胞膜染成绿色环状而细胞核未被染色；经20µmol/LAβ25-35处理过的PC12细胞则出现较多典型的细胞

8、凋亡征象，不仅可见早期凋亡细胞同时可见晚期的凋亡细胞，即胞膜和胞核同时染色，细胞膜染成绿色环状，胞核染成红色；而经5µmol/L姜黄素同