线粒体氧化应激与实验性糖尿病肾病足细胞的损伤

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1、天津医科人学博f：学位论文中文摘要目的：糖尿病肾病(DiabeticNephropathy，DN)是糖尿病重要微血管并发症之一，肾脏氧化应激是引起DN的重要原因之一，而。肾小球足细胞是肾脏损伤的重要靶细胞。本研究则应用实验性糖尿病大鼠模型，观察肾脏皮质线粒体氧化应激水平及其对足细胞的结构和功能的影响，并应用线粒体特异的抗氧化剂Q硫辛酸进行干预，观察其是否对肾脏具有保护作用。方法：1．应用一次性尾静脉注射STZ方法建立糖尿病大鼠模型，并随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)和糖尿病硫辛酸干预组(LA)。2．分别在DM成模后

2、的2w、4w、8w、12w测定各组肾功能相关指标；观察肾脏形态学改变；比色法检测肾脏皮质线粒体氧化应激指标(MDA含量、Mn—SOD活力、CAT活力、GSH含量、GSH-Px活力)；应用间接免疫荧光技术进行肾小球足细胞计数，realtimePCR技术和Westernblot法测定足细胞裂孔膜分子nephrin的mRNA和蛋白表达水平。3．以ImageJ软件进行图像分析；所有数据以叉±S表示，用SPSS11．0统计软件处理。结果：1．成功建立糖尿病大鼠模型。2．肾皮质线粒体内氧化应激指标：1)随鼠龄的增加NC组大鼠氧化应激指标没

3、有明显变化。2)DM组MDA水平4w时开始升高，随着病程的延长逐渐增高升高；LA组MDA较同期DM组下降，但仍高于NC组(P<0．01)。3)DM组GSH水平4w开始明显低于NC组，并随病程显著下降；LA组比同期DM组升高了，但仍低于NC组(P<0．01)。4)DM组2w开始Mn-SOD活力比NC组明显降低，随病程进展逐渐降低(P<0．01)；LA组较同期DM组明显升高(P

4、LA组2w时比同期DM组升高(PO．05)。3NC组可见PCX阳性信号沿肾小球血管壁走行分布均匀，连续；DM组PCX阳性信号分布不均匀，而且断裂，LA组较删组信号分布均匀，定量分析结果显天淬医科人学博I：学位论义示，DM组2w开始PCX平均荧光密度低于同期NC组：随着病程的延长逐渐减

5、弱，具有显著性差异(PO．05)。6相关回归分析1)DM组umA、UTP、BUN、Sere与MDA、GSH—PX呈J下相关，与M

6、n—SOD、GSH、CAT呈负相关(P

7、细胞PCX荧光密度、Nephrin表达量呈正相关(P<0．01)，与尿中脱落足细胞数呈负相关(P<0．01)。LA组肾小球足细胞PCX密度、Nephrin表达与MDA和GSH关系密切，呈线性关系(P

8、粒体存在明显的氧化损伤，其抗氧化能力显著下降。2．氧化应激与尿蛋白、肾功能减退明显相关。3．肾皮质线粒体氧化应激与肾小球足细胞数量减少，nephrin表达下降明显相关。4．足细胞脱落是引起其减少的重要原因之一，并与氧化应激水平相关，能够反映糖尿病肾病的进展。5．LA能够部分降