鼠神经营养因子3重组腺病毒表达载体dna构建

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1、华中科技大学同济医学院硕士学位论文ConstructiontheDNAofrecombinantadenovirusvectorexpressingtheneurotrophin-3Departmentofhandsurgery,UnionHospital,TongjiMedicalcollege,HuazhonguniversityofscienceandtechnologyPostgraduate:肠haoAdvisor:ProfWangfahinAbstractO讨ective:ToconstructtheDNAofre

2、combinantadenovintsvectorexpressingtheratneurotrophin-3foradvancedstudyofexpressingneurotrophin-3ineukaryoticcellsandclinicalresearch.Methods:ApariofDNAprimersweredesignedbycomputertoampli勿theSDratneurotrophin-3DNAwithPCRfromthetemplateoflymphaticcellgenomeofthesple

3、en.Theacquiredgenewastranslatedintoescherichiacoliform131-15aafteritwaslinkedwithanadenoviralshuttleplasmidpAdtrack-CMVThentherecombinantadenovirusexpress吨plasmidpAdtrack-CMV-NT3wascotransformedintoE.coliBj5183withanadenoviralbackboneplasmidpAdeasy-1.Theobtainedreco

4、mbinantplasmidpAd-NT3wascleaved衍restrictionendonucleasePact,thentheDNAofrecombinantadenovirusvectorexpressingN7一一wasconstructed.Result:ThepAdtrack-CMV-NT3wassenttoTakaraBio-companytoanalyzetheDNAsequenceofthePCRproduction,theoutcomewasindenticaltoratNT-3genesequence

5、ofGeneBank.AnalysisofrestrictionendonucleasedigestionofpAd-NT3andtheresultsshowedthesame2华中科技大学同济医学院硕士学位论文asweexpectedSuccessinconstructingtheDNAofrecombinantadenovirusvectorexpressingtheneurotrophin-3willpromotethefurtherresearchinmolecularbiologyofnerotrophin-3and

6、thepAd-NT3canbepotentiallyusedinneuropathicdiseasegenetherapy.Keywords:neurotrophin-3;adenovirusvector;PCR华中科技大学同济医学院硕士学位论文前言神经营养因子一3(Neurotrophin-3,NT-3)是神经生长因子家族中的重要一员，为Andreashohn等于1990年首次从鼠脑的海马中分离并纯化出来[11。近年来的研究发现，NT-3具有维持神经元存活、促进神经元的分化与增殖[2,31、诱导轴突生长【4,51、促进损伤神

7、经的修复16,71等作用。由于NT-3的这些生理作用，很多专家学者制备了神经疾病动物模型，将NT-3应用于治疗颅脑损伤、脊髓损伤、周围神经损伤、肌萎缩性侧索硬化症、老年痴呆症、神经系统肿瘤等疾病的试验研究，并证实了NT-3在治疗这些疾病中可发挥高效作用。基于NT-3在动物模型中作用的研究成果，Amgen和Regeneron合作发起了NT-3临床试验。初步研究结果显示250ug/kgNT-3的肌肉注射可被良好耐受，二期研究计划又评测出NT-3在治疗糖尿病外周神经疾病上的效用和安全性，勾画出了NT-3在临床应用上的美好前景。NT-

8、3的发现为神经性疾病的治疗带来了曙光，但由于治疗神经性疾病多需较长疗程，在NT-3临床应用阶段就存在着一个给药途径的问题:传统的生物活性蛋白是通过局部注射给药，将NT-3每日注射于病变部位存在着病变区药物浓度不稳定、患者心理及经济负担重、治疗依从性低、中枢给药容易引入致命的机