鼠神经营养因子3重组腺病毒表达载体DNA的构建

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1、华中科技大学同济医学院硕十学位论文鼠神经营养因子3重组腺病毒表达载体DNA的构建华中科技大学同济医学院附属协和医院手外科学位申请人:吴昊导师:王发斌教授摘要目的:构建鼠神经营养因子3重组腺病毒表达载体』)NA，为制备完整的腺病毒表达载体，进一步使神经营养因子3进行真核表达及临床研究提供实验基础。防法:取SD大鼠脾淋巴细胞染色体DNA为模板，以计算机辅助软件设计一对引物，PCR扩增出NF-3的编码基因。将所得基因片段与腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV连接后所得腺病毒表达质粒pAdtrack-CMV-NT3转化DH5

2、。大肠杆菌进行扩增:再将提纯的pAdtrack-CMV-NT3线性化后与腺病毒的结构质粒pAdeasy-1共转染工程大肠杆菌Bj5183，使二者在其中发生同源重组，所得质粒pAd-NT3以限制性核酸内切酶Pact酶切后即得到线状的神经营养因子3重组腺病毒表达载体的DNA.(图，)丰结果:将pAdtrack-CMV-NT3送交、KaRa生物公司行NT-3测序，所得结果与GeneBank报道完全一致:pAd-NT3以Pact酶切后行琼脂糖凝胶电泳鉴定，结果与预期一致。关键词:神经营养因子3,'腺病毒载体，‘PCR华中科技大

3、学同济医学院硕士学位论文ConstructiontheDNAofrecombinantadenovirusvectorexpressingtheneurotrophin-3Departmentofhandsurgery,UnionHospital,TongjiMedicalcollege,HuazhonguniversityofscienceandtechnologyPostgraduate:肠haoAdvisor:ProfWangfahinAbstractO讨ective:ToconstructtheDNAofrec

4、ombinantadenovintsvectorexpressingtheratneurotrophin-3foradvancedstudyofexpressingneurotrophin-3ineukaryoticcellsandclinicalresearch.Methods:ApariofDNAprimersweredesignedbycomputertoampli勿theSDratneurotrophin-3DNAwithPCRfromthetemplateoflymphaticcellgenomeofthes

5、pleen.Theacquiredgenewastranslatedintoescherichiacoliform131-15aafteritwaslinkedwithanadenoviralshuttleplasmidpAdtrack-CMVThentherecombinantadenovirusexpress吨plasmidpAdtrack-CMV-NT3wascotransformedintoE.coliBj5183withanadenoviralbackboneplasmidpAdeasy-1.Theobtai

6、nedrecombinantplasmidpAd-NT3wascleaved衍restrictionendonucleasePact,thentheDNAofrecombinantadenovirusvectorexpressingN7一一wasconstructed.Result:ThepAdtrack-CMV-NT3wassenttoTakaraBio-companytoanalyzetheDNAsequenceofthePCRproduction,theoutcomewasindenticaltoratNT-3g

7、enesequenceofGeneBank.AnalysisofrestrictionendonucleasedigestionofpAd-NT3andtheresultsshowedthesame2华中科技大学同济医学院硕士学位论文asweexpectedSuccessinconstructingtheDNAofrecombinantadenovirusvectorexpressingtheneurotrophin-3willpromotethefurtherresearchinmolecularbiologyofn

8、erotrophin-3andthepAd-NT3canbepotentiallyusedinneuropathicdiseasegenetherapy.Keywords:neurotrophin-3;adenovirusvector;PCR华中科技大学同济医学院硕士学位论文前言神经营养因子一3(Neurotrophin-3,NT